合成時間根據多肽序列長度和難易程度有所不同。常規多肽合成時間大約為2周,同時,金斯瑞提供快速多肽合成服務,快至3天交付。
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合成時間根據多肽序列長度和難易程度有所不同。常規多肽合成時間大約為2周,同時,金斯瑞提供快速多肽合成服務,快至3天交付。
金斯瑞多肽以凍干粉的形式發貨,儲存在2ml離心管內,同時可按客戶需求進行分裝。每條多肽均提供MS和HPLC報告,除此之外,如果訂購了額外的QC,金斯瑞也提供對應的檢測報告。
金斯瑞提供純度區間為粗品,>70%到>98%的多肽。舉例來說,純度為>95%,表示凍干粉中多肽凈含量(不是總重)的95%是您的目標多肽,另外5%是非目標多肽,純化過程中被一起帶入到了產品中。多肽合成的過程中,因為某些氨基酸位點縮合效率略低,導致縮合不完全,所以就產生了非目標多肽。一般情況下我們用反相高效液相色譜(RP-HPLC)來檢測多肽純度。
不同的實驗需要特定的多肽純度,下表是幾種多肽應用領域中的純度建議。
最低純度 | 應用領域 | |
---|---|---|
粗品 | 突變篩選 | 蛋白質組學 |
序列優化 | 受體-配體相互作用 | |
>75% | ELISA 檢測 | 多抗抗原設計 |
多肽陣列 | 抗原親和性分析 | |
>85% | 體外生物分析 | Western blot |
表位篩選 | 半定量酶機制研究 | |
多抗開發 | 細胞粘附性研究 | |
>95% | 體外分析 | 定量磷酸化研究 |
NMR 研究 | 定量蛋白酶解研究 | |
定量配體-受體互作研究 | ||
>98% | 晶體學研究 | 臨床研究 |
GMP級多肽藥物研究 | SAR研究 | |
化妝品肽研究 |
金斯瑞是通過反相高效液相色譜(RP-HPLC)測定目標肽中肽鍵在特定吸收波長下的紫外吸收值計算得到多肽純度的,用水和乙腈梯度洗脫的方式來分離提純得到。其中,水分和殘留的鹽分并不能通過UV檢測器進行測定,檢測結果還存在其他一些雜質,包括殘缺序列肽(比目標肽少一個或更多氨基酸殘基的短肽)、截序列(因防止殘缺序列肽的產生封端產生的多肽)、脫保護不完全的肽(合成或者最終切割過程中產生的多肽)。
理解多肽凈含量和多肽總重(毛重)的區別是非常重要的。一般情況下,多肽凍干粉樣品不僅僅包含多肽,同時包含一些其它物質,例如水,被多肽吸收的溶劑,反離子和鹽。
多肽總重(毛重)是指所有這些混合物的重量。
凈肽含量是相對于非肽類物質、平衡離子以及水分而言的,除去這些,剩余的即為凈肽含量。凈肽含量可通過氮元素分析或者氨基酸組分分析進行測定,通常占總肽總重的50-80%。
凈肽含量不同于多肽純度,多肽純度是指目標多肽占樣品中多肽的百分比。
多肽樣品中雜質大部分是反離子,小部分包含水、被多肽吸收的溶劑和一些其他物質等。 假設交付到您手中的多肽產品中反離子三氟醋酸鹽(TFA)是唯一的非多肽雜質,理論多肽凈含量可以通過以下方式估算:
首先,我們將多肽的分子量分為兩部分,一部分是多肽,一部分是中和多肽的TFA反離子,TFA的分子量可以通過離子數量乘以TFA反離子分子量(MW=114)計算得到。 假如合成多肽的分子量是1000,這條多肽有一個游離N端和一個Arg殘基,那么理論多肽凈含量計算為1000/(1000 + 2 x 114 ) = 1000/1228 = 0.81或81%。因此,我們實際的多肽凈含量通常可以通過定量氨基酸分析獲得的。
金斯瑞獨特的PepPower?合成平臺結合了固相合成技術,液相合成技術,微波合成技術和重組延伸技術。基于PepPower?平臺,金斯瑞可根據客戶的多肽序列特性,靈活選擇合適的合成技術或組合。
每條多肽具有特殊的性質,在合成過程中有時不能達到預期的結果。如果由于一些特殊的原因,金斯瑞不能成功交付多肽樣品,金斯瑞技術支持人員會及時與您溝通聯系。
一般情況下,通過直接的化學合成方式可以獲得長度2-70AA的多肽。但是金斯瑞擁有重組延伸技術,可以合成長達200個氨基酸序列的長肽。
金斯瑞為每條多肽提供MS,HPLC報告及COA文件,其中質量控制數據包括純度、合成量、多肽分子質量及外觀等。針對特定選擇的QC檢測服務,金斯瑞也會提供相應的檢測報告。
多肽合成是從多肽的C端向N端開始合成。
多肽文庫是很多研究的高效工具,這些研究包括GPCR配體篩選,蛋白質相互作用研究,功能蛋白質組學,核苷酸結合,酶作用底物和抑制劑的篩選,抗原和表位篩選,信號分子尋找,以及其他藥物篩選的重要過程。
金斯瑞提供GMP多肽合成服務,符合FDA規范,訂單需求可發送郵件至peptide@genscript.com.cn,金斯瑞技術支持人員會與您聯系。
目前金斯瑞可以提供二分支,四分支和八分支肽。
通常您收到的多肽產品是凍干粉末包裝,收到樣品后請立即將多肽保存到干燥、避光的-20℃冷凍室,盡可能地保持多肽穩定性。
使用前,請先將裝有多肽的包裝管從冷凍室放置到室溫干燥條件下,待其溫度自然升溫到室溫后,再打開瓶蓋。否則,開蓋時空氣中水汽會進入樣品管,降低多肽穩定性。
一旦打開,應迅速稱量完畢,并立即密閉以免潮解,親水性多肽更應注意避免反復凍融。短期的運輸中外界溫度不會影響多肽的有效期和質量。
在化學術語中,反離子是溶液或電化學系統中與另一個離子具有相反電荷的離子。在多肽合成中,反離子如TFA被用于將多肽與樹脂分離過程以及高效液相色譜分離。具體來說,當序列中含有堿性氨基酸,如Arg、His和Lys或含有N端游離氨基時,需要TFA進行質子化,從而得到TFA鹽。
但是在細胞方面的實驗中,高濃度TFA可能會有一定的影響(可見造成多肽分析實驗失敗的五大原因)。金斯瑞提供了兩種優質TFA去除服務:保證型TFA轉鹽(保證TFA含量<1%)和標準型TFA轉鹽(TFA<10%)。
常用的載體蛋白有血藍蛋白(KLH)、牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)三種,由于載體蛋白的分子較大,結構較復雜,其水溶性有限,導致少部分多肽偶聯完載體蛋白后,溶液中會出現絮狀的懸濁液,不是完全澄清透明的。一般情況下,這并不影響其免疫原性,渾濁液可以用于免疫反應。
金斯瑞建議在設計磷酸化修飾時,磷酸化修飾距離N 末端不超過10個氨基酸,以避免耦合效率下降。點擊查看金斯瑞多種磷酸化修飾。
一般最多做三個,還需要根據具體序列分析。
金斯瑞建議在多肽分子和熒光修飾之間添加linker,可以減少熒光修飾對多肽折疊以及與受體結合的影響。但是,如果熒光修飾的目的是為了定量不同結構間的熒光遷移,則不建議引入linker。
這類修飾可以賦予多肽序列天然蛋白質的特性。
聚乙二醇修飾是通過共價鍵結合的方式向目標分子添加高分子聚合物(乙二醇)。聚乙二醇修飾通過偽裝多肽,騙過宿主細胞的免疫系統,增強多肽的治療效果,并增加疏水藥物的溶解度和生物利用率。它也可以通過降低腎臟清除率來延長多肽的循環時間。
可以。D型天然氨基酸一共19種。天然氨基酸中Gly 沒有手性結構,其他天然氨基酸的D型結構在金斯瑞都可以選擇。可查看金斯瑞特殊氨基酸列表。
金斯瑞提供5-FAM、FITC、TMR、pNA、AMC、AFC、Dansyl和MCA。詳情請看金斯瑞熒光修飾列表。
常用作linker 的氨基酸包括Ahx, Beta-Ala, Gly, GABA, Ava