eGFP mRNA可以表達增強綠色熒光蛋白,開放閱讀框序列源于水母(Aequorea Victoria),激發與發射波長 (Ex/Em) 分別為488nm和507nm。常用于mRNA療法中實驗體系或遞送體系的優化與驗證。
金斯瑞現貨mRNA,具備Cap1結構,提升mRNA翻譯效率和表達量,添加100 poly A尾模擬成熟mRNA,更穩定。可針對全序列進行m1Ψ或5-MOU修飾,有效降低免疫原性和細胞毒性。
細胞表達驗證結果
實驗1:eGFP mRNA (m1Ψ)
實驗方法:96孔板中,每孔加入0.2 μg mRNA + 0.5 μL lipofectamine2000等轉染A549細胞(4 x 104 個細胞 / 孔),孵育16-24小時,用酶標儀、流式細胞儀、熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡檢測eGFP表達,激發波長485nm,發射波長535nm。
實驗結果:A. 共聚焦顯微鏡,eGFP mRNA (m1Ψ)轉染組可見明顯的eGFP蛋白的綠色熒光,藍色熒光為Dapi細胞核核料。B. LC-MS檢測eGFP mRNA加帽效率高達99.5%。
實驗2:eGFP mRNA (5-MOU)
實驗方法:96孔板中,每孔加入0.2 μg mRNA + 0.5 μL lipofectamine2000等轉染A549細胞(4 x 104 個細胞 / 孔),孵育16-24小時,用酶標儀、流式細胞儀、熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡檢測eGFP表達,激發波長485nm,發射波長535nm。
實驗結果:24h后,酶標儀檢測,eGFP mRNA轉染組中eGFP具有較高的表達量。