實驗結果： 針對基因A和基因B，分別采用金斯瑞設計平臺和其他設計軟件設計siRNA序列，通過qPCR檢測對應mRNA水平，實驗驗證結果表明，金斯瑞設計的siRNA的基因沉默效率 ( knockdown efficiency, KD% )更高，活性更好。
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多元化方案
經驗豐富，交付快
| 服務詳情 | 長度* | 規格* | 設計類型 | 純化方式 | 修飾 | 偶聯類型 | QC* | 檢測方案# |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| siRNA | 19-25nt | 5nmol – kg級別 |
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支持鎖核酸( LNA )，硫代，甲基化，2-Ome等200多種修飾 | 抗體，多肽，脂質等 |
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| ASO | 10-30nt |
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注：*其他長度或交付量歡迎詳詢。歡迎查看更多定制化QC>>
交付產品與報告
| QC項目 | 檢測方式 | 檢測標準 | 標準QC | 定制化QC |
|---|---|---|---|---|
| 外觀 | 目視檢查 | 白色或淡黃色粉末 | ||
| 分子量 | MS | 理論分子量偏差±0.1% | ||
| 雜質分析 | LC-MS | 檢測報告 | ||
| LC MS/MS測序 | 高分辨率的質譜測序 | 序列覆蓋度100% | ||
| 純度 | HPLC | 雙鏈siRNA：純度高達90% | ||
| 純度 | CGE | 檢測報告 | ||
| 純度 | PAGE | 檢測報告 | ||
| pH | pH計 | 檢測報告 | ||
| TEA Salt殘留 | GC-MS | 檢測報告 | ||
| 溶劑殘留 | GC-MS | 檢測報告 | ||
| 內毒素 | 顯色法 | 檢測報告 | ||
| 生物負載 | 直接培養法 / 膜過濾法 | 檢測報告 |
| 疾病類型 / 細胞類型 | 細胞系名稱 |
|---|---|
| 膀胱癌 | RT-4 |
| 宮頸癌 | Hela |
| 癌癥相關成纖維細胞 | SJCRH30 |
| 白血病 | THP1, Jurkat, SUP-T1, NALM-6 |
| 肝癌 | HepG2, Huh-7, Hep3B |
| 肺癌 | A549, H1975, H358 |
| 神經母細胞瘤 | SH-SY5Y, SK-N-BE(2) |
| 卵巢癌 | RMG-1 |
| 皮膚癌 | A375, A431 |
| 結腸癌 | SW480 |
| 非癌性細胞 | HEK293T, HUVECS |
| 小鼠細胞 | L929S, CHO, Raw264，4T1，B16-F10 |
| 原代細胞 | PBMC，原代食蟹猴肝細胞 |
金斯瑞同樣支持其他定制化的細胞系
實驗結果： 針對基因A和基因B，分別采用金斯瑞設計平臺和其他設計軟件設計siRNA序列，通過qPCR檢測對應mRNA水平，實驗驗證結果表明，金斯瑞設計的siRNA的基因沉默效率 ( knockdown efficiency, KD% )更高，活性更好。
實驗結果： 高效的定點偶聯技術實現siRNA和抗體的偶聯（ARC, Antibody RNA Conjugation）不僅可以保證顯著的基因沉默效率，還可以實現靶向遞送。
表達抗體受體蛋白的細胞可以觀察到50%的基因沉默效率 ( 左圖 )，不表達抗體受體蛋白的細胞未見基因沉默效率 ( 右圖 )。
實驗結果：使用LNP包封siRNA，基因沉默效率可高達96%。
實驗結果：金斯瑞設計的siRNA文庫中，經過篩選實驗可以獲得大量優于陽性對照的siRNA序列。本次實驗在100+序列中篩選出了20條序列，開展后續優化實驗。
針對該20條初篩序列，進行不同位置/不同類型的修飾，用于提升基因沉默效率。優化后的序列，活性大幅提升，IC50僅為陽性對照的1/10。
ELISA
應用：分泌蛋白的定量
優勢：支持定性和定量，可使用酶標儀檢測
免疫熒光染色
應用：膜蛋白的定量
優勢：支持定性和定量，可使用流式細胞儀檢測
Western blot
應用：多種蛋白的定量
優勢：支持定性和半定量，可使用凝膠電泳檢測
RNAi (RNA interference)是由dsRNA介導的，由特定酶參與的特異性基因沉默現象，通過堿基互補識別和抑制靶mRNA，阻斷基因的表達，實現對蛋白表達的調控。科學家通過設計靶向某種疾病的致病基因轉錄的mRNA的小核酸藥物，抑制或封閉該致病基因的表達，即可達到治療疾病的目的。
siRNA ( 小分子干擾RNA，Small interfering RNA )
機理： siRNA與AGO2蛋白等形成基因沉默復合物RISC，RISC具有核酸酶的功能，特異性切割降解靶標mRNA。siRNA還可作為引物與靶RNA結合并在依賴RNA的RNA聚合酶(RdRP)作用下合成更多新的dsRNA，新合成的dsRNA再由核酸內切酶Dicer切割產生大量的次級siRNA，從而使RNAi的作用放大，進一步降解靶mRNA。
特點：
ASO (反義寡核苷酸)
機理：一類是基于RNase H1-介導的mRNA降解機制，ASO通過堿基互補配對原則，與目標RNA相結合，形成RNA/DNA異二聚體，被內源性細胞RNase H識別并降解，從而達到誘導基因沉默，減少蛋白翻譯。另一大類是基于ASO結合帶來的空間位阻，封閉mRNA關鍵區域，從而影響mRNA的成熟或者翻譯為蛋白。
特點:
| 項目 | 小分子藥物 | 抗體藥 | 小核酸藥 | 基因治療 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 特點 | 性質 | 小分子化合物 | 蛋白 | RNA | DNA/基因編輯組件 |
| 分子量 | 小（<900 da） | 高（~150 kda） | 中等（13-16 kda） | 中等 | |
| 靶點數量 | ++ | + | ++++ | +++ | |
| 靶點類型 | 蛋白 | 分泌蛋白 / 膜蛋白 | mRNA | DNA | |
| 特異性 | ++ | +++ | ++++ | +++ | |
| 半衰期 | + (~Hours-days) | ++ (~Days-week) | ++++ (~Months) | ++++（數月） | |
| 免疫原性 | 低 | 高 | 低 | 低 | |
| 基因隨機插入風險 | 無 | 無 | 無 | 有 | |
| 研發 | 穩定性 | 穩定 | 不穩定 | 不穩定 | 不穩定 |
| 遞送 | 簡單 | 難 | 難 | 難 | |
| 合成/實驗周期 | 數月 | 數月 | 數周 | 數周 | |
| 優化周期 | 慢 | 慢 | 快 | 慢 | |
| 規模生產 | 容易 | 難 | 容易 | 中等 | |
