產(chǎn)品列表

產(chǎn)品生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)

應(yīng)用案例

• 不同級(jí)別Cas9蛋白產(chǎn)品保持連續(xù)性且高的基因編輯效率
  

  圖1: 不同級(jí)別Cas9蛋白在原代T細(xì)胞的TRAC基因敲除實(shí)驗(yàn)的基因敲除效率分析。分別使用RUO級(jí)別和GMP級(jí)別的野生型和突變型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA ，通過(guò)電轉(zhuǎn)方式對(duì)人原代T細(xì)胞進(jìn)行TRAC基因敲除實(shí)驗(yàn)。該結(jié)果表明GMP級(jí)別的Cas9蛋白在T細(xì)胞的TRAC位點(diǎn)敲除實(shí)驗(yàn)中，與RUO級(jí)別Cas0蛋白產(chǎn)品擁有高度一致的基因敲除效率，敲除效率均為95%以上。隨著開(kāi)發(fā)項(xiàng)目逐漸向臨床階段推進(jìn)，可以較快的從RUO級(jí)別Cas9蛋白產(chǎn)品轉(zhuǎn)換到GMP級(jí)別Cas9蛋白產(chǎn)品。

  本次實(shí)驗(yàn)體系：

  參數(shù)	數(shù)值
  Cas9蛋白用量	~4 μg
  Cas9: sgRNA (摩爾比)	1:2
  RNP投入量	~25 pmol
  細(xì)胞數(shù)	1.0 × 106
  反應(yīng)體積	20 μl

• GMP級(jí)別Cas9蛋白在不同規(guī)模電轉(zhuǎn)體系中都有較高基因編輯效率
  

  圖2：GMP級(jí)別Cas9蛋白在不同規(guī)模電轉(zhuǎn)體系中的基因編輯效率分析。使用GMP級(jí)別的野生型和突變型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA，通過(guò)電轉(zhuǎn)方式分別在20 μl和100 μl反應(yīng)體系中對(duì)人原代T細(xì)胞進(jìn)行TRAC基因敲除實(shí)驗(yàn)。該結(jié)果表明GMP級(jí)別的Cas9蛋白在兩個(gè)反應(yīng)體系中擁有高度一致的基因敲除效率，敲除效率均為95%以上。

  本次實(shí)驗(yàn)體系：

  參數(shù)	數(shù)值
  轉(zhuǎn)染體系	20 μl	100 μl
  Cas9 蛋白用量	~4 μg	~20 μg
  Cas9: sgRNA (摩爾比)	1:2	1:2
  RNP 投入量	~25 pmol	~125 pmol
  細(xì)胞數(shù)	1.0 × 106	5.0 × 106

• GMP級(jí)別突變型Cas9蛋白實(shí)現(xiàn)高效率和低脫靶的基因編輯
  

  圖3：GMP級(jí)別突變型Cas9蛋白在原代T細(xì)胞基因編輯效率和脫靶率分析。使用金斯瑞GMP級(jí)別的野生型和突變型Cas9蛋白及競(jìng)品野生型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA，通過(guò)電轉(zhuǎn)方式在人原代T細(xì)胞系中進(jìn)行TRAC及GM-CSF基因敲除實(shí)驗(yàn)。該結(jié)果表明金斯瑞提供的GMP級(jí)別突變型Cas9與野生型Cas9蛋白在原代T細(xì)胞不同靶位點(diǎn)上均有相似的基因敲除效率，并表現(xiàn)出比野生型更低的脫靶效率。

  本次實(shí)驗(yàn)體系：

  參數(shù)	數(shù)值
  靶點(diǎn)	TRAC	GM-CSF
  Cas9蛋白用量	~1.2 μg	~4 μg
  Cas9: sgRNA (摩爾比)	1:3	1:2
  RNP投入量	~7.5 pmol	~25 pmol
  細(xì)胞數(shù)	2.0 × 105	1.0 × 106
  反應(yīng)體積	10 μl	20 μl

• GMP級(jí)別Cas9蛋白實(shí)現(xiàn)高效率基因敲入效率
  

  圖4：GMP級(jí)別Cas9在原代T細(xì)胞中TRAC基因中敲入GFP基因的效率分析。使用GMP級(jí)別的野生型和突變型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA，通過(guò)電轉(zhuǎn)方式在人原代T細(xì)胞TRAC基因位點(diǎn)進(jìn)行原位敲入實(shí)驗(yàn)。該結(jié)果表明GMP級(jí)別的Cas9蛋白在原代T細(xì)胞中有高基因敲入效率。

  本次實(shí)驗(yàn)體系：

  參數(shù)	數(shù)值
  Cas9蛋白用量	~4 μg
  Cas9: sgRNA (摩爾比)	1:2
  RNP投入量	~25 pmol
  細(xì)胞數(shù)	1.0 × 106
  HDR Donor	2 μg
  反應(yīng)體積	20 μl

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