產(chǎn)品亮點

超高的靈敏度

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產(chǎn)品檢測靈敏度LoB=0.14 ng/ml, LoQ=0.5 ng/ml

準(zhǔn)確性好

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• 回收率80%-120%，檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，受基質(zhì)影響小
• 精密度好，批內(nèi)和批間CV<10%

標(biāo)準(zhǔn)品可靠

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內(nèi)含國家標(biāo)準(zhǔn)品，定標(biāo)準(zhǔn)確

穩(wěn)定性好

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有效期大于12個月

產(chǎn)品列表

檢測原理

• BSA ELISA試劑盒

  金斯瑞B(yǎng)SA ELISA試劑盒利用了兩種抗牛血清白蛋白（BSA）的抗體，它們可與BSA的不同表位結(jié)合。

  當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品加入捕獲板時，BSA蛋白可以被包被在捕獲板上的抗BSA抗體捕獲。然后在體系中加入與生物素結(jié)合的抗BSA檢測抗體，該檢測抗體可以與捕獲板上結(jié)合的BSA相互作用。隨后添加的鏈霉親和素-辣根過氧化物酶偶聯(lián)物 (Streptavidin-HRP) 可與生物素偶聯(lián)的抗BSA抗體 (Biotin Anti-BSA Antibody) 相互作用。在洗滌步驟后，加入 3,3‘,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺溶液（TMB溶液），可在體系中形成藍(lán)色復(fù)合物。通過添加終止溶液終止反應(yīng)。終止溶液可使的體系顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色。顏色的強(qiáng)度可以通過酶標(biāo)儀在 450 nm和650 nm處讀取。測試樣品中BSA的濃度可根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線實現(xiàn)精準(zhǔn)定量。

  

  圖 1. BSA ELISA試劑盒檢測原理

驗證數(shù)據(jù)

• 高準(zhǔn)確度和回收率

  回收率用于確定分析物檢測是否受樣品基質(zhì)差異的影響，通過將已知量的分析物加標(biāo)到不同的樣品基質(zhì)中來驗證回收率。以下是根據(jù)具有代表性的準(zhǔn)確度驗證生成的報告和數(shù)據(jù)示例，在這項驗證中，使用3批次試劑盒（GenScript，L00976），將20 ng/mL的分析物加標(biāo)到基質(zhì)中混合驗證回收率，樣本重復(fù)測量3次。

  表 1. 三批次試劑盒回收率測試結(jié)果

  批次	重復(fù)次數(shù)	平均測值（ng/mL）	回收率
  			實測
  #1	3	20.21	101%
  #2	3	19.42	100%
  #3	3	18.44	111%

• 高批內(nèi)批間精密度

  A. 批內(nèi)精密度/重復(fù)性

  批內(nèi)精密度驗證體現(xiàn)測定板內(nèi)每孔之間的重復(fù)性，有助于確保在測定板的不同孔中運(yùn)行樣本檢測可以給出可靠的結(jié)果。
  以下是根據(jù)具有代表性的批內(nèi)精密度驗證生成的報告和數(shù)據(jù)示例，在這項驗證中，使用試劑盒（GenScript，L00976）分別對低、中、高3個濃度水平的樣本進(jìn)行測試，每個樣本各重復(fù)檢測10次，計算變異系數(shù)(CV)。

  表 2-1. 三批次試劑盒批內(nèi)精密度驗證結(jié)果

  批次編號	重復(fù)次數(shù)	平均測值（ng/mL）	%CV
  			實測
  #1	10	2.03	5%
  #1	10	14.07	5%
  #1	10	21.47	5%
  #2	10	2.06	8%
  #2	10	15.36	10%
  #2	10	23.34	9%
  #3	10	2.09	8%
  #3	10	13.45	8%
  #3	10	21.42	8%

  B. 批間精密度

  批間精密度體現(xiàn)同一樣品在多批測定間的重現(xiàn)性，有助于確保在不同批次試劑盒中運(yùn)行樣本檢測可以給出可靠的結(jié)果。
  以下是根據(jù)具有代表性的批間精密度驗證生成的報告和數(shù)據(jù)示例，在這項驗證中，使用3個不同批次試劑盒（GenScript，L00976）分別對低、中、高3個濃度水平的樣本進(jìn)行測試，每個樣本各重復(fù)檢測10次，每個樣本計算30次，測量濃度結(jié)果和變異系數(shù)(CV)。

  表 2-2. 三批次試劑盒批間差驗證結(jié)果

  批次數(shù)量	重復(fù)次數(shù)	平均測值（ng/mL）	%CV
  			實測
  3	3x10	2.1	7%
  3	3x10	14.3	9%
  3	3x10	22.1	8%

• 線性

  線性是相對于基于標(biāo)準(zhǔn)曲線計算的分析物量定義的。線性驗證實驗提供了樣本在不同稀釋水平下測試的精度信息，有助于確保在分析的動態(tài)范圍內(nèi)試劑盒能夠準(zhǔn)確測量分析物濃度。
  以下是根據(jù)具有代表性的線性驗證生成的報告和數(shù)據(jù)示例，在這項驗證中，對樣本稀釋至測定范圍，使用試劑盒（GenScript，L00976）對其進(jìn)行測定，每個樣本重復(fù)檢測3次，計算其濃度的平均值，將結(jié)果的平均值和理論值進(jìn)行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)r。

  表 3. 試劑盒線性驗證結(jié)果

  重復(fù)次數(shù)	預(yù)期理論值 （ng/mL）	平均測值 （ng/mL）	測值/預(yù)期 %	線性 r
  3	2	2.24	112%	＞0.999
  3	3.15	2.92	93%
  3	6.25	7.27	116%
  3	13.5	12.65	94%
  3	25	22.47	90%

• 專屬性

  向中濃度樣本及空白基質(zhì)中添加不同濃度的HSA(人血清白蛋白)，考察方法的專屬性。上表是使用BSA ELISA檢測試劑盒(貨號:L00976)，根據(jù)具有代表性的交叉干擾驗證生成的數(shù)據(jù)示例。結(jié)果顯示，20 mg/mL的HAS對檢測不會造成明顯影響。

  表 4. 試劑盒特異性驗證結(jié)果

  加標(biāo)HSA 濃度 (mg/mL)	BSA 理論測值 (ng/mL)	BSA 實際測值 (ng/mL)	回收率 (%)
  20	8	6.5	81
  10	8	6.8	83
  1	8	7.7	96
  0.1	8	8.5	107

• 鉤狀效應(yīng)

  鉤狀效應(yīng)是指在一定的濃度范圍內(nèi)，分析物的濃度與檢測信號值呈正比，但當(dāng)分析物超過某一濃度界限后，信號值反而隨著濃度的增高而下降的現(xiàn)象。以下是根據(jù)具有代表性的鉤狀效應(yīng)生成的報告和數(shù)據(jù)示例，在這項驗證中，使用3批次試劑盒（GenScript，L00976）對其測定出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)的濃度限。

  表 5. 試劑盒鉤狀效應(yīng)（Hook效應(yīng)）驗證結(jié)果

  批次編號	濃度限（μg/mL）
  #1	35
  #2	30
  #3	30

常見問題解答

• 如何避免BSA污染？
  • 向酶標(biāo)板中加入每種試劑時，都應(yīng)懸空加入，以防止移液器吸頭插入造成污染。
  • 確保實驗操作環(huán)境、離心管和移液器吸頭沒有BSA污染。過濾式移液器吸頭可以有效防止BSA污染。
  • 在BSA檢測中，每次洗滌后使用的吸水紙用后都需要丟棄，更換新的吸水紙以備下次洗滌后使用，以避免BSA污染。
  • 由于本實驗存在潛在的污染風(fēng)險，操作人員必須特別小心。如果手套接觸到其他實驗的試劑，則必須在進(jìn)行該BSA檢測之前更換手套以防止污染。

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