GenScript預制膠選擇指南

金斯瑞蛋白預制膠推薦使用GenBox電泳槽，獨特擋板使PAGE膠受力均勻，電泳條帶更加平直。

金斯瑞蛋白預制膠可兼容國內外常見mini凝膠電泳槽，部分電泳槽名稱如下：

Bio-Rad Mini-PROTEAN^? II&3電泳槽*

六一、天能

GradiGel Mini 4-Cell

IBI Universal Protein System

EC 4-Cell

Hoefer Mighty Small?（SE250/SE260）

Daiichi Mini 2-Gel&6-Gel

Invitrogen Novex XCell & Surelock^?（搭配金斯瑞特供擋板一起使用）

*使用前請將電泳槽內芯綠色膠條反轉，詳情見說明書

金斯瑞蛋白預制膠可兼容MOPS或MES電泳緩沖液，能實現更寬范圍分子量蛋白的分離，搭配MOPS使用更好的分離大分子蛋白（>30kDa)，搭配MES使用能更好的分離小分子蛋白（<30kDa) 。

預制膠類型	孔數	最大上樣量/well	推薦蛋白量/well
SurePAGE™蛋白預制膠	10	80 μl	60 μg
	12	60 μl	60 μg
	15	40 μl	60 μg

金斯瑞提供兩種上樣緩沖液：5X Sample Buffer（Cat. No. MB01015）含變性劑SDS和10%還原劑β-巰基乙醇；4X LDS Sample Buffer（Cat. No. M00676）含變性劑LDS，不含還原劑。

下圖顯示，與SDS樣品緩沖液相比，LDS樣品緩沖液可以更好地分離蛋白質樣品。

產品詳情

• 應用數據

  超強均一性

  

  凝膠：SurePAGE，4-12%，12 wells（Genscript，M00653）
  染色：eStain蛋白染色儀（Genscript，L00657C），9min 30s
  Lane1，3，5，7，9，11：4μl Color Prestained Protein Standard，Broad Range (11-245kDa) (P7712S)；
  Lane2，4，6，8，10，12：6μl E.coli cell lysate。

  金斯瑞獨特的凝膠制造工藝保證批次間優秀的穩定性和可靠的條帶分布一致性。

  優越的分辨率

  

  從圖中可以看出，SurePAGE蛋白預制膠的分辨率優于Express Plus和Competitor A和B，尤其在30KDa以下的小片段的分辨率上更高，條帶更加銳利和清晰。

  凝膠：SurePAGE，4-12%，12 wells（Genscript，M00653）
  樣品：Top 10 cell
  染色：eStain蛋白染色儀（Genscript，L00657C），9min 30s

  超高的靈敏度

  

  從下圖中可以看出從下圖中可以看出SurePAGE?預制膠能夠檢測含量低至12.5ng的蛋白樣品，比其他產品具有更高的檢測靈敏度。

  凝膠：SurePAGE?，4-12%，12 wells（Genscript，M00653）
  樣品：
  Lane 1：Protein Standard（MM1397-500），5μl；
  Lane 2-8：溶菌酶含量分別為800ng，400ng，200ng，100ng，50ng，25ng，12.5ng；
  Lane 9-10：Protein Standard（MM1397-500），5 ul
  染色：eStain蛋白染色儀（Genscript，L00657C），9min 30s
  

  Western blot轉印分析

  

  SurePAGE蛋白預制膠的靈敏度和分辨率很優越，能夠確保低含量的蛋白條帶也能夠清晰銳利，在Western blot轉印之后含量低的小條帶能夠順利地被檢測到，有了SurePAGE?預制膠這個助手，您的Western blot實驗會更加輕松！

  凝膠：SurePAGE? Gel，4-20%，10 wells（GenScript，M00655）
  轉膜：eBlot? L1快速濕轉儀（L00686），10min，NC膜
  上樣：WB-MASTER Protein Standard（GenScript，M00521），其中80KDa條帶的蛋白含量
  從左到右依次為：10ng，5ng，2.5ng，1.25ng，0.625ng，0.3125ng。

• 產品參數

  凝膠厚度	1.0 mm
  凝膠體系	Bis-Tris
  凝膠大小	Mini Gels (10 x 8 cm)
  保質期	2-8℃儲存18個月，常溫25℃左右可保存6個月
  電泳緩沖液	Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder (Cat. No. M00138) 或MES SDS Running Buffer Powder (Cat. No. M00677)

產品列表

• SurePAGE?蛋白預制膠

  產品編號	名稱	數量	價格	操作
  M00652	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-12%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00653	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-12%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00654	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-12%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00655	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-20%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00656	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-20%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00657	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-20%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00658	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8-16%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00659	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8-16%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00660	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8-16%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00661	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00662	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00663	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00664	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 10%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00665	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 10%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00666	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 10%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00667	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 12%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00668	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 12%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00669	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 12%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00719	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 15%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX

• 蛋白預制膠電泳相關試劑列表

  產品編號	名稱	數量	價格	操作
  M00138	Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder		￥150.00 1 Box (5/PK)
  M00139	Transfer Buffer Powder		￥248.00 1 Box (10/PK)
  M00676	4X LDS Sample Buffer		￥100.00 10 ml 250 ml
  M00677	MES SDS Running Buffer Powder		￥150.00 1 box(5pcs)
  MB01015	5X Sample Buffer		￥150.00 5 ml

蛋白純化、分析相關產品

資源

常見問題解答

• 1. 金斯瑞蛋白預制膠在使用前，有哪些注意事項？

  金斯瑞蛋白預制膠打開包裝即可用于蛋白電泳實驗，但請一定撕掉膠板底部藍色封口膠帶、不能使用Tri-Gly電泳緩沖液、并請檢查電泳槽密封條是否需要翻轉，以保證內槽密封。

• 2. 使用金斯瑞蛋白預制膠，應該使用什么電泳緩沖液？

  GenScript蛋白預制膠可兼容MOPS或MES電泳緩沖液，能實現更寬范圍分子量蛋白的分離，搭配MOPS使用更好的分離大分子蛋白（>30kD)，搭配MES使用能更好的分離小分子蛋白（<30kD) 。不適配Tris-Gly電泳緩沖液，表現為電泳到凝膠一半位置無法繼續遷移，且marker分不開。

• 3. 1 Х MOPS電泳緩沖液配制后是否需要調節pH值？

  金斯瑞Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder（Cat.No：M00138）在產品設計時已經考慮了成品緩沖液pH值。配制成溶液后即可用于蛋白電泳實驗，pH≈7.6。

• 4. 5X Sample Buffer（Cat. No. MB01015）和4X LDS Sample Buffer（Cat. No. M00676）的區別是什么，是否含還原劑？

  金斯瑞提供5X Sample Buffer含變性劑SDS和10%還原劑β-巰基乙醇；4X LDS Sample Buffer含變性劑LDS，不含還原劑，如需要可以按照說明書中比例額外添加。

• 5. 一塊膠完成電泳需要多長時間？

  電泳時間取決于選取的電泳緩沖液、凝膠濃度以及興趣蛋白的分子量大小。在MOPS電泳緩沖液，200V恒壓條件下，電泳時間通常是30+分鐘，一片凝膠電泳時，初始電流大約在95-120mA。高電壓會引起電泳實驗體系溫度上升，導致電泳過程出現不可預料的情況，適當降低電泳儀輸出電壓設定，可以幫助改善電泳情況。

• 6. ExpressPlus?預制膠和SurePAGE?預制膠可以用于哪些電泳槽？

  兼容以下電泳槽：

  • 六一、天能
  • GradiGel Mini 4-Cell
  • IBI Universal Protein System
  • EC 4-Cell
  • Hoefer Mighty Small（SE 260/SE 250）
  • Daiichi Mini 2-Gel&6-Gel
  • Bio-Rad Mini-PROTEANII&3
  • Invitrogen Novex XCell I，II，&Surelock（須與金斯瑞提供的擋板一起使用）
• 7. GenScript蛋白預制膠后續做WB實驗推薦蛋白上樣量是多少？

  因為每個樣品中目的蛋白含量以及抗體和蛋白結合的效果都不一樣，建議通過預實驗摸索最佳上樣量或參考文獻；第一次做可以從10ug開始梯度上樣，再通過實驗結果調整。

• 8. 蛋白預制膠的pH值為多少？

  金斯瑞Bis-Tris蛋白預制膠pH6.4。

• 9. 金斯瑞蛋白預制膠能否用于非變性電泳？

  預制膠不含SDS，可以用于酸性蛋白（PI<6.4）非變性電泳。整套電泳體系中不能含有SDS，搭配非變性電泳緩沖液（Cat. No. M00727C/M00729C）和上樣緩沖液（Cat. No. M00726C）使用。

• 10. 使用金斯瑞蛋白預制膠進行非變性電泳 ，是否有推薦的實驗條件？

  非變性電泳由于受蛋白質的亞基及電荷量少的影響，存在條帶偏移率低（泳動速度慢）、條帶不夠鋒利等現象。由于非變性電泳時間較長，請根據實驗設計先進行電泳條件優化。電泳緩沖液應調至堿性使酸性蛋白盡可能多的帶上電荷，每個蛋白的性質和帶電量都不一樣，具體需要通過實驗摸索最適電泳條件和PH值。

• 11. GenScript預制膠是否可以跑還原/非還原電泳嗎？

  可以，預制膠中不含還原劑，可根據實驗需要，在上樣緩沖液中添加還原劑。

• 12. 電泳過程中，溴酚藍前沿上方為什么會有一條黃色的線？

  Loading buffer中有酚紅，酚紅在PH值6.8以內為黃色，在pH值8.4以上時為紅色，不影響實驗結果。

• 13. 可以后續切膠做質譜嗎？

  可以。

• 14. MOPS濃縮液變黃可以使用嗎？

  MOPS和Tris會發生氧化，保質期內變黃不影響使用。

• 15. 為什么在蛋白轉印時凝膠變的很粘？

  低濃度凝膠質地較軟，轉膜時易受熱，與轉印膜粘連。

• 16. 其他公司的出品的染料是否可以用于金斯瑞預制膠染色？

  每家公司的蛋白染料產品配方不同。以考馬斯亮藍G250或R250為主要成分的染色液與ExpressPlus預制膠產品兼容性較好。推薦使用金斯瑞出品的eStain L1蛋白染色儀（Cat.No：L00657）對電泳后凝膠進行處理。目前確認金斯瑞蛋白預制膠與Thermo Fisher Scientific Inc.的染料不兼容。天根生化科技（北京）有限公司的考馬斯亮藍快速染色液可用于ExpressPlus預制膠產品的染色。

• 17. 過夜脫色會影響條帶的銳度嗎？

  不同的脫色液配方會影響脫色效果。推薦用于過夜脫色的脫色液配方是：15%乙醇，10%乙酸的水溶液。

• 18. ExpressPlus?預制膠和SurePAGE?預制膠在室溫下穩定嗎？

  SurePAGE™在25℃左右可保存6個月。為獲得更佳的實驗效果，請2-8℃保存。

• 19. 如何使用傳統染色脫色方法處理蛋白預制膠？
  • A. 考馬斯亮藍R-250使用微波爐染色：
  1. 配制染色液：在40%乙醇和10%醋酸溶液中溶解終濃度為0.1%（W/V）的考馬斯亮藍R-250。
  2. 配制脫色液：將終濃度為10%（V/V）乙醇、7.5%（V/V）醋酸溶解在一起。
  3. 電泳完成后，撬開膠板取出凝膠，然后放入裝有100ml染色液的染色容器中。
  4. 蓋上容器蓋子并放入微波爐中用高熱檔位加熱8分鐘。為了避免危險，請注意不要讓溶液沸騰。
  5. 從微波爐中取出染色容器，放在脫色搖床上常溫輕搖5分鐘。
  6. 倒掉染色液并用去離子水小心清洗凝膠。
  7. 倒掉去離子水，并加入100ml脫色液。
  8. 蓋上蓋子，放入微波爐中用高熱檔位加熱8分鐘。
  9. 倒掉脫色液，加入新的脫色液，重復步驟8。
  10. 從微波爐中取出，放在脫色搖床上常溫輕輕震蕩至背景清晰。
  • B. 考馬斯亮藍R-250常規染色：
  1. 配制染色液：在40%乙醇和10%醋酸溶液中溶解終濃度為0.1%（W/V）的考馬斯亮藍R-250。
  2. 配制脫色液：將終濃度為10%（V/V）乙醇、7.5%（V/V）醋酸溶解在一起。
  3. 電泳完成后，撬開膠板取出凝膠，然后放入裝有100ml染色液的染色容器中。
  4. 放于搖床上輕搖1小時。
  5. 倒掉染色液并用去離子水小心清洗凝膠。
  6. 倒掉去離子水，并加入100ml脫色液。
  7. 放于搖床上輕搖1小時。
  8. 更換新鮮脫色液，繼續放于搖床上脫色1小時。
  9. 重復步驟7、8一次。
  10. 更換新鮮脫色液，放于搖床上過夜脫色至次日背景清晰。
• 20. 預制膠疑難解答

  問題	可能原因	解決方法
  條帶變形	上樣孔中有氣泡或者有凝膠保存緩沖液。	加注電泳緩沖液前后，使用注射器吸取緩沖液輕輕沖洗上樣孔，將氣泡吹出。
  	樣品蛋白濃度過高。	使用上樣緩沖液稀釋蛋白樣品。
  條帶拖曳、滯孔	樣品中含有較大顆粒雜質如細胞碎片、菌體碎片。	高速離心后，取上清液電泳。
  	蛋白樣品（如包涵體蛋白）	在樣品中添加額外的十二烷基硫酸鈉硫酸鈉（SDS）或者使用上樣緩沖液稀釋樣品。
  	未充分溶解。
  高濃度條帶出現在相鄰泳道	上樣時，樣品溢出到相鄰條帶。	降低上樣量。發現溢出時使用緩沖液沖洗上樣孔。
  	上樣孔破損	移除制孔梳時加倍小心。發現上樣孔破損后換用新的凝膠。
  	膠板變形。	在安裝預制膠時先移除制孔梳，再固定在電泳槽內。
  		使用墊片、翻轉密封條時注意是否會對凝膠產生過大的壓力，導致凝膠變形。
  	凝膠變干，上樣孔萎縮。	打開包裝后，防止凝膠干燥。
  		為防止凝膠變干，可以盡快裝置到電泳槽內，并加注電泳緩沖液。
  		懷疑凝膠變干時，可將凝膠在電泳緩沖液中浸泡一段時間，待凝膠恢復形狀后上樣。
  泳道整體成外“八”字形	電泳槽內槽漏液	確認電泳槽與金斯瑞預制膠是否匹配，如有階梯狀硅膠條應翻轉到平坦的一面 ；
  		電泳槽兩端盡量水平，將內槽液加滿，并觀察5min內槽液是否有液面降低情況，如有請重新檢查安裝；
  		防止電泳液出現大量氣泡；
  		如仍然漏液，建議更換電泳槽，或在電泳過程中補加內槽液，確保內槽液加滿狀態。
  	膠板變形。	安裝預制膠時先移除制孔梳，再固定在電泳槽內。
  		使用墊片、翻轉密封條時注意是否會對凝膠產生過大的壓力，導致凝膠變形。
  條帶遷移速度過慢	凝膠底部綠色膠帶未移除。	移除綠色密封膠帶。
  	凝膠安裝不當，電泳槽內槽漏液（與外槽有溶液聯通現象）。	檢查內槽密封條、墊片等附件是否安裝恰當。
  		確認凝膠安裝位置，重新安裝凝膠。
  	電壓設置有誤，或者使用了不當的電泳緩沖液。	推薦使用140V恒壓條件電泳。
  		推薦使用正確濃度的MOPS電泳緩沖液
  蛋白條帶前沿模糊	離子干擾（小分子蛋白電泳容易出現此現象）。	換用MES電泳緩沖液。
  蛋白條帶前沿變黃	電泳緩沖液性能下降，pH降低	換用新鮮配制的電泳緩沖液。
  	外槽液太少	外槽電泳液加到2/3處，防止電泳過程中溫度過高
  	使用兩邊夾緊架膠類型的電泳槽如伯樂、天能（會概率性的使板變形從而跑黃）	推薦使用GenScript配套電泳槽（Cat.No. L00780），受力更均勻，
  蛋白分離效果不佳	凝膠濃度選擇不當。	根據凝膠最佳分離范圍選用不同濃度凝膠。
  		對于小分子蛋白的分離，請選用較高分離膠濃度的預制膠產品或者換用專門為小蛋白開發的預制膠產品。
  	樣品蛋白量超出凝膠分離能力。	降低上樣量，將總蛋白量控制在60μg以內
  	樣品含鹽量過高。	使用透析、超濾，或者稀釋的方法降低鹽濃度后電泳。
  	電泳體系溫度過高。	提高電泳緩沖液用量。
  		或者使用冰袋對緩沖液降溫降溫、在低溫環境中進行電泳實驗等方法改善效果。
  	MOPS電泳緩沖液性能無法達到實驗設計要求。	換用MES電泳緩沖液進行嘗試。
  8%的膠在轉膜時粘在膜上	凝膠濃度低、質地較軟，轉膜時易受熱，與轉印膜粘連。	添加冰袋、或在低溫環境中進行實驗，控制轉膜溫度。
  酸性蛋白的非變性電泳條帶模糊，點樣空附近跑不下來	非變性電泳由于受蛋白質的亞基及電荷量少的影響，存在涌動速度慢、條帶不夠鋒利等現象。	優化電泳緩沖液的pH，保證蛋白條帶帶有足夠的電量。
  堿性蛋白的非變性電泳結果不理想	金斯瑞蛋白預制膠不適合跑堿性蛋白的非變性電泳。	建議客戶使用手工玻璃膠，摸索電泳緩沖液的pH進行電泳。