GenScript預(yù)制膠選擇指南

金斯瑞蛋白預(yù)制膠推薦使用GenBox電泳槽，獨(dú)特?fù)醢迨筆AGE膠受力均勻，電泳條帶更加平直。

金斯瑞蛋白預(yù)制膠可兼容國(guó)內(nèi)外常見mini凝膠電泳槽，部分電泳槽名稱如下：

Bio-Rad Mini-PROTEAN^? II&3電泳槽*

六一、天能

GradiGel Mini 4-Cell

IBI Universal Protein System

EC 4-Cell

Hoefer Mighty Small?（SE250/SE260）

Daiichi Mini 2-Gel&6-Gel

Invitrogen Novex XCell & Surelock^?（搭配金斯瑞特供擋板一起使用）

*使用前請(qǐng)將電泳槽內(nèi)芯綠色膠條反轉(zhuǎn)，詳情見說明書

金斯瑞蛋白預(yù)制膠可兼容MOPS或MES電泳緩沖液，能實(shí)現(xiàn)更寬范圍分子量蛋白的分離，搭配MOPS使用更好的分離大分子蛋白（>30kDa)，搭配MES使用能更好的分離小分子蛋白（<30kDa) 。

預(yù)制膠類型	孔數(shù)	最大上樣量/well	推薦蛋白量/well
SurePAGE™蛋白預(yù)制膠	10	80 μl	60 μg
	12	60 μl	60 μg
	15	40 μl	60 μg

金斯瑞提供兩種上樣緩沖液：5X Sample Buffer（Cat. No. MB01015）含變性劑SDS和10%還原劑β-巰基乙醇；4X LDS Sample Buffer（Cat. No. M00676）含變性劑LDS，不含還原劑。

下圖顯示，與SDS樣品緩沖液相比，LDS樣品緩沖液可以更好地分離蛋白質(zhì)樣品。

產(chǎn)品詳情

• 應(yīng)用數(shù)據(jù)

  超強(qiáng)均一性

  

  凝膠：SurePAGE，4-12%，12 wells（Genscript，M00653）
  染色：eStain蛋白染色儀（Genscript，L00657C），9min 30s
  Lane1，3，5，7，9，11：4μl Color Prestained Protein Standard，Broad Range (11-245kDa) (P7712S)；
  Lane2，4，6，8，10，12：6μl E.coli cell lysate。

  金斯瑞獨(dú)特的凝膠制造工藝保證批次間優(yōu)秀的穩(wěn)定性和可靠的條帶分布一致性。

  優(yōu)越的分辨率

  

  從圖中可以看出，SurePAGE蛋白預(yù)制膠的分辨率優(yōu)于Express Plus和Competitor A和B，尤其在30KDa以下的小片段的分辨率上更高，條帶更加銳利和清晰。

  凝膠：SurePAGE，4-12%，12 wells（Genscript，M00653）
  樣品：Top 10 cell
  染色：eStain蛋白染色儀（Genscript，L00657C），9min 30s

  超高的靈敏度

  

  從下圖中可以看出從下圖中可以看出SurePAGE?預(yù)制膠能夠檢測(cè)含量低至12.5ng的蛋白樣品，比其他產(chǎn)品具有更高的檢測(cè)靈敏度。

  凝膠：SurePAGE?，4-12%，12 wells（Genscript，M00653）
  樣品：
  Lane 1：Protein Standard（MM1397-500），5μl；
  Lane 2-8：溶菌酶含量分別為800ng，400ng，200ng，100ng，50ng，25ng，12.5ng；
  Lane 9-10：Protein Standard（MM1397-500），5 ul
  染色：eStain蛋白染色儀（Genscript，L00657C），9min 30s
  

  Western blot轉(zhuǎn)印分析

  

  SurePAGE蛋白預(yù)制膠的靈敏度和分辨率很優(yōu)越，能夠確保低含量的蛋白條帶也能夠清晰銳利，在Western blot轉(zhuǎn)印之后含量低的小條帶能夠順利地被檢測(cè)到，有了SurePAGE?預(yù)制膠這個(gè)助手，您的Western blot實(shí)驗(yàn)會(huì)更加輕松！

  凝膠：SurePAGE? Gel，4-20%，10 wells（GenScript，M00655）
  轉(zhuǎn)膜：eBlot? L1快速濕轉(zhuǎn)儀（L00686），10min，NC膜
  上樣：WB-MASTER Protein Standard（GenScript，M00521），其中80KDa條帶的蛋白含量
  從左到右依次為：10ng，5ng，2.5ng，1.25ng，0.625ng，0.3125ng。

• 產(chǎn)品參數(shù)

  凝膠厚度	1.0 mm
  凝膠體系	Bis-Tris
  凝膠大小	Mini Gels (10 x 8 cm)
  保質(zhì)期	2-8℃儲(chǔ)存18個(gè)月，常溫25℃左右可保存6個(gè)月
  電泳緩沖液	Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder (Cat. No. M00138) 或MES SDS Running Buffer Powder (Cat. No. M00677)

產(chǎn)品列表

• SurePAGE?蛋白預(yù)制膠

  產(chǎn)品編號(hào)	名稱	數(shù)量	價(jià)格	操作
  M00652	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-12%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00653	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-12%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00654	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-12%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00655	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-20%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00656	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-20%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00657	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 4-20%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00658	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8-16%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00659	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8-16%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00660	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8-16%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00661	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00662	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00663	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 8%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00664	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 10%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00665	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 10%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00666	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 10%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00667	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 12%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00668	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 12%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00669	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 12%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00719	SurePAGE?, Bis-Tris, 10x8, 15%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX

• 蛋白預(yù)制膠電泳相關(guān)試劑列表

  產(chǎn)品編號(hào)	名稱	數(shù)量	價(jià)格	操作
  M00138	Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder		￥150.00 1 Box (5/PK)
  M00139	Transfer Buffer Powder		￥248.00 1 Box (10/PK)
  M00676	4X LDS Sample Buffer		￥100.00 10 ml 250 ml
  M00677	MES SDS Running Buffer Powder		￥150.00 1 box(5pcs)
  MB01015	5X Sample Buffer		￥150.00 5 ml

蛋白純化、分析相關(guān)產(chǎn)品

資源

常見問題解答

• 1. 金斯瑞蛋白預(yù)制膠在使用前，有哪些注意事項(xiàng)？

  金斯瑞蛋白預(yù)制膠打開包裝即可用于蛋白電泳實(shí)驗(yàn)，但請(qǐng)一定撕掉膠板底部藍(lán)色封口膠帶、不能使用Tri-Gly電泳緩沖液、并請(qǐng)檢查電泳槽密封條是否需要翻轉(zhuǎn)，以保證內(nèi)槽密封。

• 2. 使用金斯瑞蛋白預(yù)制膠，應(yīng)該使用什么電泳緩沖液？

  GenScript蛋白預(yù)制膠可兼容MOPS或MES電泳緩沖液，能實(shí)現(xiàn)更寬范圍分子量蛋白的分離，搭配MOPS使用更好的分離大分子蛋白（>30kD)，搭配MES使用能更好的分離小分子蛋白（<30kD) 。不適配Tris-Gly電泳緩沖液，表現(xiàn)為電泳到凝膠一半位置無法繼續(xù)遷移，且marker分不開。

• 3. 1 Х MOPS電泳緩沖液配制后是否需要調(diào)節(jié)pH值？

  金斯瑞Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder（Cat.No：M00138）在產(chǎn)品設(shè)計(jì)時(shí)已經(jīng)考慮了成品緩沖液pH值。配制成溶液后即可用于蛋白電泳實(shí)驗(yàn)，pH≈7.6。

• 4. 5X Sample Buffer（Cat. No. MB01015）和4X LDS Sample Buffer（Cat. No. M00676）的區(qū)別是什么，是否含還原劑？

  金斯瑞提供5X Sample Buffer含變性劑SDS和10%還原劑β-巰基乙醇；4X LDS Sample Buffer含變性劑LDS，不含還原劑，如需要可以按照說明書中比例額外添加。

• 5. 一塊膠完成電泳需要多長(zhǎng)時(shí)間？

  電泳時(shí)間取決于選取的電泳緩沖液、凝膠濃度以及興趣蛋白的分子量大小。在MOPS電泳緩沖液，200V恒壓條件下，電泳時(shí)間通常是30+分鐘，一片凝膠電泳時(shí)，初始電流大約在95-120mA。高電壓會(huì)引起電泳實(shí)驗(yàn)體系溫度上升，導(dǎo)致電泳過程出現(xiàn)不可預(yù)料的情況，適當(dāng)降低電泳儀輸出電壓設(shè)定，可以幫助改善電泳情況。

• 6. ExpressPlus?預(yù)制膠和SurePAGE?預(yù)制膠可以用于哪些電泳槽？

  兼容以下電泳槽：

  • 六一、天能
  • GradiGel Mini 4-Cell
  • IBI Universal Protein System
  • EC 4-Cell
  • Hoefer Mighty Small（SE 260/SE 250）
  • Daiichi Mini 2-Gel&6-Gel
  • Bio-Rad Mini-PROTEANII&3
  • Invitrogen Novex XCell I，II，&Surelock（須與金斯瑞提供的擋板一起使用）
• 7. GenScript蛋白預(yù)制膠后續(xù)做WB實(shí)驗(yàn)推薦蛋白上樣量是多少？

  因?yàn)槊總€(gè)樣品中目的蛋白含量以及抗體和蛋白結(jié)合的效果都不一樣，建議通過預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳上樣量或參考文獻(xiàn)；第一次做可以從10ug開始梯度上樣，再通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整。

• 8. 蛋白預(yù)制膠的pH值為多少？

  金斯瑞B(yǎng)is-Tris蛋白預(yù)制膠pH6.4。

• 9. 金斯瑞蛋白預(yù)制膠能否用于非變性電泳？

  預(yù)制膠不含SDS，可以用于酸性蛋白（PI<6.4）非變性電泳。整套電泳體系中不能含有SDS，搭配非變性電泳緩沖液（Cat. No. M00727C/M00729C）和上樣緩沖液（Cat. No. M00726C）使用。

• 10. 使用金斯瑞蛋白預(yù)制膠進(jìn)行非變性電泳 ，是否有推薦的實(shí)驗(yàn)條件？

  非變性電泳由于受蛋白質(zhì)的亞基及電荷量少的影響，存在條帶偏移率低（泳動(dòng)速度慢）、條帶不夠鋒利等現(xiàn)象。由于非變性電泳時(shí)間較長(zhǎng)，請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)先進(jìn)行電泳條件優(yōu)化。電泳緩沖液應(yīng)調(diào)至堿性使酸性蛋白盡可能多的帶上電荷，每個(gè)蛋白的性質(zhì)和帶電量都不一樣，具體需要通過實(shí)驗(yàn)摸索最適電泳條件和PH值。

• 11. GenScript預(yù)制膠是否可以跑還原/非還原電泳嗎？

  可以，預(yù)制膠中不含還原劑，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，在上樣緩沖液中添加還原劑。

• 12. 電泳過程中，溴酚藍(lán)前沿上方為什么會(huì)有一條黃色的線？

  Loading buffer中有酚紅，酚紅在PH值6.8以內(nèi)為黃色，在pH值8.4以上時(shí)為紅色，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

• 13. 可以后續(xù)切膠做質(zhì)譜嗎？

  可以。

• 14. MOPS濃縮液變黃可以使用嗎？

  MOPS和Tris會(huì)發(fā)生氧化，保質(zhì)期內(nèi)變黃不影響使用。

• 15. 為什么在蛋白轉(zhuǎn)印時(shí)凝膠變的很粘？

  低濃度凝膠質(zhì)地較軟，轉(zhuǎn)膜時(shí)易受熱，與轉(zhuǎn)印膜粘連。

• 16. 其他公司的出品的染料是否可以用于金斯瑞預(yù)制膠染色？

  每家公司的蛋白染料產(chǎn)品配方不同。以考馬斯亮藍(lán)G250或R250為主要成分的染色液與ExpressPlus預(yù)制膠產(chǎn)品兼容性較好。推薦使用金斯瑞出品的eStain L1蛋白染色儀（Cat.No：L00657）對(duì)電泳后凝膠進(jìn)行處理。目前確認(rèn)金斯瑞蛋白預(yù)制膠與Thermo Fisher Scientific Inc.的染料不兼容。天根生化科技（北京）有限公司的考馬斯亮藍(lán)快速染色液可用于ExpressPlus預(yù)制膠產(chǎn)品的染色。

• 17. 過夜脫色會(huì)影響條帶的銳度嗎？

  不同的脫色液配方會(huì)影響脫色效果。推薦用于過夜脫色的脫色液配方是：15%乙醇，10%乙酸的水溶液。

• 18. ExpressPlus?預(yù)制膠和SurePAGE?預(yù)制膠在室溫下穩(wěn)定嗎？

  SurePAGE™在25℃左右可保存6個(gè)月。為獲得更佳的實(shí)驗(yàn)效果，請(qǐng)2-8℃保存。

• 19. 如何使用傳統(tǒng)染色脫色方法處理蛋白預(yù)制膠？
  • A. 考馬斯亮藍(lán)R-250使用微波爐染色：
  1. 配制染色液：在40%乙醇和10%醋酸溶液中溶解終濃度為0.1%（W/V）的考馬斯亮藍(lán)R-250。
  2. 配制脫色液：將終濃度為10%（V/V）乙醇、7.5%（V/V）醋酸溶解在一起。
  3. 電泳完成后，撬開膠板取出凝膠，然后放入裝有100ml染色液的染色容器中。
  4. 蓋上容器蓋子并放入微波爐中用高熱檔位加熱8分鐘。為了避免危險(xiǎn)，請(qǐng)注意不要讓溶液沸騰。
  5. 從微波爐中取出染色容器，放在脫色搖床上常溫輕搖5分鐘。
  6. 倒掉染色液并用去離子水小心清洗凝膠。
  7. 倒掉去離子水，并加入100ml脫色液。
  8. 蓋上蓋子，放入微波爐中用高熱檔位加熱8分鐘。
  9. 倒掉脫色液，加入新的脫色液，重復(fù)步驟8。
  10. 從微波爐中取出，放在脫色搖床上常溫輕輕震蕩至背景清晰。
  • B. 考馬斯亮藍(lán)R-250常規(guī)染色：
  1. 配制染色液：在40%乙醇和10%醋酸溶液中溶解終濃度為0.1%（W/V）的考馬斯亮藍(lán)R-250。
  2. 配制脫色液：將終濃度為10%（V/V）乙醇、7.5%（V/V）醋酸溶解在一起。
  3. 電泳完成后，撬開膠板取出凝膠，然后放入裝有100ml染色液的染色容器中。
  4. 放于搖床上輕搖1小時(shí)。
  5. 倒掉染色液并用去離子水小心清洗凝膠。
  6. 倒掉去離子水，并加入100ml脫色液。
  7. 放于搖床上輕搖1小時(shí)。
  8. 更換新鮮脫色液，繼續(xù)放于搖床上脫色1小時(shí)。
  9. 重復(fù)步驟7、8一次。
  10. 更換新鮮脫色液，放于搖床上過夜脫色至次日背景清晰。
• 20. 預(yù)制膠疑難解答

  問題	可能原因	解決方法
  條帶變形	上樣孔中有氣泡或者有凝膠保存緩沖液。	加注電泳緩沖液前后，使用注射器吸取緩沖液輕輕沖洗上樣孔，將氣泡吹出。
  	樣品蛋白濃度過高。	使用上樣緩沖液稀釋蛋白樣品。
  條帶拖曳、滯孔	樣品中含有較大顆粒雜質(zhì)如細(xì)胞碎片、菌體碎片。	高速離心后，取上清液電泳。
  	蛋白樣品（如包涵體蛋白）	在樣品中添加額外的十二烷基硫酸鈉硫酸鈉（SDS）或者使用上樣緩沖液稀釋樣品。
  	未充分溶解。
  高濃度條帶出現(xiàn)在相鄰泳道	上樣時(shí)，樣品溢出到相鄰條帶。	降低上樣量。發(fā)現(xiàn)溢出時(shí)使用緩沖液沖洗上樣孔。
  	上樣孔破損	移除制孔梳時(shí)加倍小心。發(fā)現(xiàn)上樣孔破損后換用新的凝膠。
  	膠板變形。	在安裝預(yù)制膠時(shí)先移除制孔梳，再固定在電泳槽內(nèi)。
  		使用墊片、翻轉(zhuǎn)密封條時(shí)注意是否會(huì)對(duì)凝膠產(chǎn)生過大的壓力，導(dǎo)致凝膠變形。
  	凝膠變干，上樣孔萎縮。	打開包裝后，防止凝膠干燥。
  		為防止凝膠變干，可以盡快裝置到電泳槽內(nèi)，并加注電泳緩沖液。
  		懷疑凝膠變干時(shí)，可將凝膠在電泳緩沖液中浸泡一段時(shí)間，待凝膠恢復(fù)形狀后上樣。
  泳道整體成外“八”字形	電泳槽內(nèi)槽漏液	確認(rèn)電泳槽與金斯瑞預(yù)制膠是否匹配，如有階梯狀硅膠條應(yīng)翻轉(zhuǎn)到平坦的一面 ；
  		電泳槽兩端盡量水平，將內(nèi)槽液加滿，并觀察5min內(nèi)槽液是否有液面降低情況，如有請(qǐng)重新檢查安裝；
  		防止電泳液出現(xiàn)大量氣泡；
  		如仍然漏液，建議更換電泳槽，或在電泳過程中補(bǔ)加內(nèi)槽液，確保內(nèi)槽液加滿狀態(tài)。
  	膠板變形。	安裝預(yù)制膠時(shí)先移除制孔梳，再固定在電泳槽內(nèi)。
  		使用墊片、翻轉(zhuǎn)密封條時(shí)注意是否會(huì)對(duì)凝膠產(chǎn)生過大的壓力，導(dǎo)致凝膠變形。
  條帶遷移速度過慢	凝膠底部綠色膠帶未移除。	移除綠色密封膠帶。
  	凝膠安裝不當(dāng)，電泳槽內(nèi)槽漏液（與外槽有溶液聯(lián)通現(xiàn)象）。	檢查內(nèi)槽密封條、墊片等附件是否安裝恰當(dāng)。
  		確認(rèn)凝膠安裝位置，重新安裝凝膠。
  	電壓設(shè)置有誤，或者使用了不當(dāng)?shù)碾娪揪彌_液。	推薦使用140V恒壓條件電泳。
  		推薦使用正確濃度的MOPS電泳緩沖液
  蛋白條帶前沿模糊	離子干擾（小分子蛋白電泳容易出現(xiàn)此現(xiàn)象）。	換用MES電泳緩沖液。
  蛋白條帶前沿變黃	電泳緩沖液性能下降，pH降低	換用新鮮配制的電泳緩沖液。
  	外槽液太少	外槽電泳液加到2/3處，防止電泳過程中溫度過高
  	使用兩邊夾緊架膠類型的電泳槽如伯樂、天能（會(huì)概率性的使板變形從而跑黃）	推薦使用GenScript配套電泳槽（Cat.No. L00780），受力更均勻，
  蛋白分離效果不佳	凝膠濃度選擇不當(dāng)。	根據(jù)凝膠最佳分離范圍選用不同濃度凝膠。
  		對(duì)于小分子蛋白的分離，請(qǐng)選用較高分離膠濃度的預(yù)制膠產(chǎn)品或者換用專門為小蛋白開發(fā)的預(yù)制膠產(chǎn)品。
  	樣品蛋白量超出凝膠分離能力。	降低上樣量，將總蛋白量控制在60μg以內(nèi)
  	樣品含鹽量過高。	使用透析、超濾，或者稀釋的方法降低鹽濃度后電泳。
  	電泳體系溫度過高。	提高電泳緩沖液用量。
  		或者使用冰袋對(duì)緩沖液降溫降溫、在低溫環(huán)境中進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn)等方法改善效果。
  	MOPS電泳緩沖液性能無法達(dá)到實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求。	換用MES電泳緩沖液進(jìn)行嘗試。
  8%的膠在轉(zhuǎn)膜時(shí)粘在膜上	凝膠濃度低、質(zhì)地較軟，轉(zhuǎn)膜時(shí)易受熱，與轉(zhuǎn)印膜粘連。	添加冰袋、或在低溫環(huán)境中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，控制轉(zhuǎn)膜溫度。
  酸性蛋白的非變性電泳條帶模糊，點(diǎn)樣空附近跑不下來	非變性電泳由于受蛋白質(zhì)的亞基及電荷量少的影響，存在涌動(dòng)速度慢、條帶不夠鋒利等現(xiàn)象。	優(yōu)化電泳緩沖液的pH，保證蛋白條帶帶有足夠的電量。
  堿性蛋白的非變性電泳結(jié)果不理想	金斯瑞蛋白預(yù)制膠不適合跑堿性蛋白的非變性電泳。	建議客戶使用手工玻璃膠，摸索電泳緩沖液的pH進(jìn)行電泳。