實驗方法：將通過GS-saRNA-1 (低免疫原性載體) 或GS-saRNA-2 (高免疫原性載體) 兩種載體制備的eGFP saRNA (m5C修飾) 100ng，分別通過LNP和Lipofectamine MessengerMAX (Thermo Fisher) 轉染HEK293細胞，24小時和48小時后通過熒光顯微鏡觀察eGFP表達量。
實驗結果：金斯瑞兩種載體制備的eGFP saRNA均有顯著的eGFP表達，LNP遞送的組別表達量更高。
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經篩選與驗證的復制酶元件與修飾
整合固定元件的即用模板，加速交付
增強與延長的蛋白表達能力
更少量的mRNA即可實現更強更持久的蛋白表達
多種載體支持多元化應用
不同免疫原性的載體可選
| 線性mRNA | 自擴增RNA | 環狀RNA | |||||
| 示意圖 |  |
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| 結構 | 線性，開放5'和3'端，易被核酸外切酶降解 | 線性，開放5'和3'端，易被核酸外切酶降解 | 閉環結構，無開放的5'端和3'端 不易被核酸外切酶降解 |
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| 核糖體招募 | 5'Cap: 啟動翻譯，使mRNA更穩定 |
5'Cap: 啟動翻譯，使mRNA更穩定 |
核糖體進入位點 (IRES): 啟動翻譯 |
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| ORF |
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| UTR | 5'端和3'端的UTR結構提升mRNA的穩定性，促進mRNA翻譯 | 5'端和3'端的UTR結構提升mRNA的穩定性，復制酶促進mRNA的自我復制 | 包含IRES+PIE+其他元件 | ||||
| PolyA尾 | 提升mRNA的穩定性，避免mRNA降解 | 提升mRNA的穩定性，避免mRNA降解 | 不需要 | ||||
| 蛋白表達量 | 強+++ | 強+++++ | 強++++ | ||||
| 蛋白表達半衰期 | 短 | 更長 | 長 | ||||
| 免疫原性 | 低 | 高 | 中等 | ||||
| 所需劑量 | 高 | 低 | 中等 | ||||
| 創新性 | 傳統 | 新 | 更新 | ||||
| 服務名稱 | 目標序列長度 | 交付量* | 純化方式& | 載體# | 修飾 | 溶劑 | QC | saRNA 制備周期 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 自擴增RNA | 100bp - 6kb | 100μg至200mg | LiCl | GS-saRNA-1 GS-saRNA-2 |
m5C或不修飾 | Sodium citrate, pH6.5 (默認0.5-2mg/ml) |
研究級-標準 研究級-升級 |
快至2周 |
* 單批次交付量，總體交付量高達g級別
& 其他純化方式歡迎請詳詢
# 不同載體匹配不同應用
| 載體名稱 | 加帽類型 | 修飾類型 | 下游應用 |
|---|---|---|---|
| GS-saRNA-1 | Cap-AU | m5C或不修飾 | 要求免疫原性比較低的應用，例如：基因療法等 |
| GS-saRNA-2 | Cap-AG | m5C或不修飾 | 要求免疫原性比較高的應用，例如：腫瘤/傳染病疫苗等 |
| saRNA現貨產品 | 修飾 | 規格 | 濃度 | 溶劑 | 周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| eGFP / F-Luc / mCherry saRNA | m5C | 50 / 100 / 200μg | 1 mg/ml | 1mM Sodium citrate, pH6.5 | 快至4天 |
| QC | 項目 | 檢測方式 | 檢測標準 | 研究級 - 標準 | 研究級 – 升級 |
|---|---|---|---|---|---|
| 鑒定 | 外觀 | 視覺觀測 | 澄清無異物 ? | ||
| RNA長度 | 毛細管電泳 (CE) | 目標長度±30% | |||
| RNA長度 | 瓊脂糖凝膠電泳 | 檢測到目標大小的條帶 | |||
| Poly(A)長度 | 酶切法和CE | 目標長度±30% | |||
| RNA含量 | 紫外吸收 | 目標含量±5% ? | |||
| pH | pH計 | 目標值±0.5 | |||
| 緩沖液規格 | 按客戶提供詳情 | N/A | |||
| 純度 | A260/280 ? | UV檢測 | 1.70 ~ 2.30 | ||
| 加帽效率 | LC-MS | ≥ 90% | |||
| 純度 | 毛細管電泳 (CE) | ≥ 70% | |||
| 雜質 | 內毒素 | 半定量 | < 10 EU/mg? |
實驗方法：將通過GS-saRNA-1 (低免疫原性載體) 或GS-saRNA-2 (高免疫原性載體) 兩種載體制備的eGFP saRNA (m5C修飾) 100ng，分別通過LNP和Lipofectamine MessengerMAX (Thermo Fisher) 轉染HEK293細胞，24小時和48小時后通過熒光顯微鏡觀察eGFP表達量。
實驗結果：金斯瑞兩種載體制備的eGFP saRNA均有顯著的eGFP表達，LNP遞送的組別表達量更高。
實驗方法：將表達eGFP的200ng線性mRNA，200ng環狀RNA和100ng saRNA通過LNP轉染HEK293T細胞。
實驗結果：saRNA組的eGFP蛋白表達量更高。較之線性mRNA和環狀RNA，saRNA僅需1/2的質量，或1/5的摩爾量即可達到更高的蛋白表達量。
實驗結果：金斯瑞saRNA基于GS-saRNA-1載體合成，m5C修飾，具有不同的經過篩選驗證的復制酶元件和修飾，與常規saRNA 比較，金斯瑞設計的GS-saRNA 具有更高的初始及持續蛋白表達量，表達量可以高達10倍。
實驗結果：
