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一站式服務(wù)，交付快
涵蓋基因合成、質(zhì)粒制備、
環(huán)化效率高，純度高
自研的環(huán)狀RNA載體、提升蛋白表達(dá)量
較之線性mRNA更穩(wěn)定，
免疫原性更低
無需加帽、加尾等修飾，
| 服務(wù)名稱 | 長度 | 交付量 | 純化方式 | QC | 交付形式 | 周期 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 定制化 環(huán)狀RNA合成 |
目標(biāo)序列：100 bp - 4 kb 全長序列：＜5 kb |
100 μg – 20 mg | HPLC | 研究級 - 標(biāo)準(zhǔn) 研究級 - 升級 |
1mM 檸檬酸鈉緩沖液, pH6.5（默認(rèn)） RNase-Free Water（可選） |
3周起 |
| 環(huán)狀RNA現(xiàn)貨 （eGFP / F-Luc） |
eGFP環(huán)狀RNA: 1,644nt F-Luc環(huán)狀RNA: 2,577nt |
25 / 50 / 100 / 200 μg | HPLC | 研究級 - 標(biāo)準(zhǔn) | 5個工作日 |
* IRES： 默認(rèn) CVB3 或客戶提供定制化IRES序列
告知我們您的ORF或IRES序列
金斯瑞將為您的環(huán)狀RNA設(shè)計(jì)包含T7啟動子, PIE, IRES和ORF
基因合成至質(zhì)粒制備
一站式完成環(huán)狀RNA制備的全部前置步驟
環(huán)狀I(lǐng)VT mRNA制備（RUO級別）
μg至mg級別，采用反相高效液相色譜的等純化方式，并進(jìn)行QC
| QC | 項(xiàng)目 | 檢測方式 | 檢測標(biāo)準(zhǔn) | 研究級 - 標(biāo)準(zhǔn) | 研究級 – 升級 |
|---|---|---|---|---|---|
| 鑒定 | 外觀 | 視覺觀測 | 澄清無異物 | ||
| RNA長度 | Bioanalyzer | 條帶位置匹配對應(yīng)長度 | |||
| 鑒定 | RNaseR降解測試 | 不會被RNaseR降解 | |||
| RNA含量 | UV吸收 | 目標(biāo)值 ± 5% | |||
| PH | PH試紙/PH計(jì) | 目標(biāo)值 ± 0.5 | |||
| 緩沖液規(guī)格 | 按客戶提供詳情 | - | |||
| 純度 | A260/280 | UV檢測 | 1.70 ~ 2.30 | ||
| HPLC檢測 | HPLC | ≥80% | |||
| 雜質(zhì) | 蛋白質(zhì)殘留 | Nano Orange染料檢測 | ≤ 1% | ||
| 質(zhì)粒DNA殘留 | qPCR | ≤ 0.1%? | |||
| 安全性 | 內(nèi)毒素 | 半定量 | < 10EU/mg | ||
| 內(nèi)毒素 | 定量 | < 10EU/mg | |||
| 生物負(fù)載 | 直接接種 | 72小時內(nèi)不生長 |
通過RT-PCR檢測mRNA拷貝數(shù)
通過熒光強(qiáng)度檢測mRNA蛋白表達(dá)量
實(shí)驗(yàn)方法：
將編碼GFP的環(huán)狀RNA（無修飾）和線性mRNA（100% N1-me-pseU修飾）以同等的mol劑量轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，用qPCR檢測編碼mRNA的豐度，用流式細(xì)胞術(shù)檢測GFP蛋白的熒光強(qiáng)度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論：72小時后
實(shí)驗(yàn)方法：
比較線性mRNA，常規(guī)環(huán)狀RNA*，金斯瑞環(huán)狀RNA（自研技術(shù)）三種編碼eGFP的mRNA，轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后蛋白表達(dá)量。
* Wesselhoeft, R.A., Kowalski, P.S. & Anderson, D.G. Engineering circular RNA for potent and stable translation in eukaryotic cells.?Nat Commun?9, 2629 (2018)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
金斯瑞環(huán)狀RNA在開始的蛋白表達(dá)量和積累的蛋白表達(dá)量上，都有更高的表達(dá)水平。
實(shí)驗(yàn)方法：
比較常規(guī)環(huán)狀RNA*，金斯瑞環(huán)狀RNA（自研技術(shù)）兩種編碼eGFP的mRNA，轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞和HEK293T細(xì)胞后，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測蛋白表達(dá)量。
* Wesselhoeft, R.A., Kowalski, P.S. & Anderson, D.G. Engineering circular RNA for potent and stable translation in eukaryotic cells.?Nat Commun?9, 2629 (2018)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
基于自研技術(shù)的金斯瑞環(huán)狀RNA，在經(jīng)過HPLC純化后，在兩個細(xì)胞上的蛋白表達(dá)量均高于常規(guī)環(huán)狀RNA 2-4倍。
實(shí)驗(yàn)方法：
將不同mRNA轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞(InvivoGen)，IL6水平檢測：Abcam Human IL-6 ELISA Kit，IFN-α水平檢測：QUANTI-Luc/Gaussia kit，NF-Kb水平檢測：QUANTI-Blue kit。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
較之線性mRNA，環(huán)狀RNA引起的細(xì)胞因子上升幅度更低，免疫原性更低。
環(huán)狀RNA是一種單鏈的mRNA分子，5端和3端鏈接形成了共價閉環(huán)，不易受RNA外切酶影響，表達(dá)更穩(wěn)定，不易降解。環(huán)狀RNA被發(fā)現(xiàn)天然存在于哺乳動物細(xì)胞中，在很多生物學(xué)過程中扮演重要角色。
環(huán)狀RNA自身優(yōu)勢為基于其開發(fā)的mRNA療法帶來的收益：
現(xiàn)階段環(huán)狀RNA的應(yīng)用：
綜上，環(huán)狀RNA的研究正在各個領(lǐng)域快速發(fā)展，從而為提升人類健康的醫(yī)療應(yīng)用提供更多新思路。
