
實驗方法:
eSpCas9 mRNA和靶向TRAC位點的sgRNA按照1:1的質量比混合,并通過金斯瑞LP01-LNP (2.4 ug of RNA/LNP)和脂質體制劑包裝后遞送至HEK293T細胞。分別在第3天和第5天裂解細胞,通過PCR和Sanger測序檢測編輯效率。
實驗結果:
金斯瑞LP01-LNP組的編輯效率可高達97%,遠高于脂質體組的編輯效率。
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* POI(Point of Interest):實際粒徑與理論粒徑相差不超過±20 nm
金斯瑞具備完整的IVT mRNA制備流程:從基因合成到LNP包裝
項目 | 檢測方式 | 檢測標準 | 研究級 - 標準 | 研究級 – 升級 |
---|---|---|---|---|
外觀 | 視覺觀測 | 澄清無異物 | ||
終濃度 | RiboGreen熒光染料檢測 | 0.1 – 0.4 mg/mL | ||
包封效率 | RiboGreen熒光染料檢測 | > 85% | ||
包封RNA的完整性 | 毛細管電泳 | > 75% | ||
粒徑 | 動態光散射 | POI ±20 nm , 65 - 125 nm | ||
多分散系數(PDI) | 動態光散射 | < 0.2 | ||
Zeta電位 | 激光多普勒電泳 | ± 15.0 mV | ||
PH? | PH試紙/PH計 | 7.4 ± 0.5? ? | ||
內毒素 | 半定量 | < 4EU/ml | ||
內毒素 | 定量 | < 4EU/ml | ||
生物負載 | 直接接種 | 48小時內不生長 |
實驗方法:
eSpCas9 mRNA和靶向TRAC位點的sgRNA按照1:1的質量比混合,并通過金斯瑞LP01-LNP (2.4 ug of RNA/LNP)和脂質體制劑包裝后遞送至HEK293T細胞。分別在第3天和第5天裂解細胞,通過PCR和Sanger測序檢測編輯效率。
實驗結果:
金斯瑞LP01-LNP組的編輯效率可高達97%,遠高于脂質體組的編輯效率。
實驗方法:
采用脂質體Lipofectamine? MessengerMAX? (ThermoFisher)或TransIT??(Mirus)和金斯瑞SM102-LNP 遞送100ng或200ng的eGFP mRNA (100% N1-methyl-pseU修飾) ,48小時后用流式細胞儀檢測eGFP表達量。
實驗結果:
金斯瑞SM102-LNP組的蛋白表達量更高,且表達蛋白的細胞比例更高。
實驗方法:
給Balb-C小鼠肌肉注射4種不同LNP制劑包封的Fluc mRNA(100% N1-methyl-pseU 修飾),劑量為0.25mg/kg。通過小鼠全身熒光成像檢測Fluc mRNA的表達量和分布。
實驗結果:
實驗方法:
給Balb-C小鼠靜脈注射2種不同LNP制劑包封的Fluc mRNA(100% N1-methyl-pseU 修飾),劑量為0.3mg/kg。通過小鼠全身熒光成像檢測Fluc mRNA的表達量和分布。
實驗結果:
什么是脂質納米顆粒(LNPs)?
脂質納米顆粒(LNPs)是可以自組裝成球形結構的天然或合成分子。LNPs通常由脂質層組成,形成了一個外殼,內部是可用于輸送藥物或其他藥物的隔離區域。由于其能夠保護藥物分子不降解并提高其生物利用度的能力,LNPs作為藥物輸送系統越來越受到關注。
LNPs還可以設計為靶向特定細胞或組織,實現更精確的藥物輸送。LNPs已被用于各種應用,包括遞送基于RNA的治療劑,如mRNA疫苗。LNPs的脂質層可以與細胞膜融合,使封裝的RNA進入細胞并發揮其治療作用。LNPs也被研究作為其他類型藥物(包括小分子和蛋白質)的潛在輸送系統。
mRNA LNP如何用于體外細胞轉染?