產品特點

覆蓋多種AAV血清型滴度檢測

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金斯瑞L01035可檢測包括但不限于：AAV1/2/5/6/8/9等血清型。

試劑盒原料自產

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抗體原料/標準品可確保高純度、高特異性、一致性和高穩定性。

試劑盒性能佳

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線性范圍寬/精密度高/準確度高。

極短檢測時間

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檢測時長約2.5小時。

產品列表

檢測原理

• AAV滴度衣殼蛋白ELISA試劑盒

  金斯瑞AAV滴度衣殼蛋白ELISA試劑盒均是利用了兩種抗AAV衣殼蛋白的單克隆抗體，它們可與衣殼蛋白的不同表位結合。當標準品或樣品加入捕獲板時，AAV衣殼蛋白可以被包被在捕獲板上的捕獲抗體捕獲，之后在體系中加入與生物素偶聯的檢測抗體，該檢測抗體可以與捕獲板上結合的衣殼蛋白相互作用。隨后添加可與生物素偶聯的檢測抗體相互作用的Streptavidin-HRP，經洗滌加入TMB和終止溶液，最后使用酶標儀讀取OD450 nm。測試樣品中衣殼蛋白的濃度可根據衣殼蛋白標準曲線實現精確定量。

  

  圖1：AAV滴度衣殼蛋白ELISA試劑盒檢測原理

驗證數據

• 稀釋線性

  表1a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes
  （GenScript, L01035）稀釋線性驗證

  Sample No.	Dilution Factor	Measured Conc. (Capsids/mL)	CV
  Sample A	36	2.11E+11	3%
  	72	2.18E+11
  	144	2.10E+11
  	288	2.26E+11
  Sample B	60	2.29E+11	8%
  	120	2.55E+11
  	240	2.74E+11
  	480	2.73E+11
  Sample C	50	1.10E+11	9%
  	100	1.31E+11
  	200	1.33E+11
  	400	1.19E+11
  Sample D	60	1.03E+11	9%
  	120	1.12E+11
  	240	9.39E+10
  	480	5.99E+10
  Sample E	50	9.78E+10	3%
  	100	1.03E+11
  	200	9.87E+10
  	400	5.94E+10

  表1b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）
  稀釋線性驗證

  Sample No.	Dilution Factor	Measured Conc. (Capsids/mL)	CV
  Sample 1	120	1.26E+11	6%
  	240	1.31E+11
  	480	1.20E+11
  	960	1.39E+11
  Sample 2	130	1.37E+11	4%
  	260	1.38E+11
  	520	1.28E+11
  	1040	1.41E+11
  Sample 3	110	1.02E+11	8%
  	220	1.08E+11
  	440	1.03E+11
  	880	1.20E+11
  Sample 4	130	2.70E+11	5%
  	260	2.76E+11
  	520	2.65E+11
  	1040	2.98E+11
  Sample 5	80	2.00E+11	5%
  	160	2.19E+11
  	320	2.20E+11
  	640	2.24E+11

  對樣本進行不同倍數的稀釋，使用AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035），AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）分析稀釋線性，結果顯示同一樣本，不同的稀釋倍數回算的樣本濃度CV＜10%，稀釋誤差以及受樣本基質影響小。

• 精密度

  表2a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes 重復性評估

  Batch No.	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  #1	10	4.03E+08	4%	4.00E+08	101%
  	10	1.24E+09	3%	1.20E+09	103%
  	10	4.70E+09	2%	5.00E+09	94%
  #2	10	4.32E+08	4%	4.00E+08	108%
  	10	1.28E+09	6%	1.20E+09	107%
  	10	4.58E+09	6%	5.00E+09	92%
  #3	10	3.94E+08	6%	4.00E+08	99%
  	10	1.24E+09	8%	1.20E+09	103%
  	10	4.50E+09	6%	5.00E+09	90%

  表2b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit 重復性評估

  Batch No.	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  #1	10	1.92E+08	6%	1.80E+08	107%
  	10	4.98E+08	7%	5.00E+08	100%
  	10	1.95E+09	2%	2.00E+09	98%
  #2	10	1.83E+08	5%	1.80E+08	102%
  	10	4.85E+08	4%	5.00E+08	97%
  	10	1.95E+09	6%	2.00E+09	98%
  #3	10	1.79E+08	6%	1.80E+08	99%
  	10	4.69E+08	5%	5.00E+08	94%
  	10	1.94E+09	6%	2.00E+09	97%

  表3a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes 三批次批間差評估

  Batch Amount	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  3	3×10	4.09E+08	6%	4.00E+08	102%
  	3×10	1.26E+09	6%	1.20E+09	105%
  	3×10	4.59E+09	5%	5.00E+09	92%

  表3b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit 三批次批間差評估

  Batch Amount	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  3	3×10	1.47E+08	9%	1.80E+08	82%
  	3×10	4.83E+08	5%	5.00E+08	97%
  	3×10	1.88E+09	6%	2.00E+09	94%

  使用三批次試劑盒分別對3個濃度水平的樣本進行測試，每個樣本各重復檢測10次。以此分析AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）和AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）的批內精密度和批間精密度。結果顯示，L01035和L00942的精密度CV<10%。< /p>

• 回收率

  表4a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）添加回收驗證

  Spiked Conc. (Capsids/mL)	Batch No.	Recovery Rate
  1.50E+08	#1	98%
  	#2	109%
  	#3	94%

  表4b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）
  添加回收驗證

  Spiked Conc. (Capsids/mL)	Batch No.	Recovery Rate
  2.00E+08	#1	100%
  	#2	103%
  	#3	93%

  使用三批次試劑盒分別對加標分析物進行測試，以此分析AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）和AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）的添加回收率。結果顯示，L01035和L00942的回收率均在80%-120%范圍內。

• L01035和L00942檢測相關性
  

  圖2：使用AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（貨號：L01035）通用型檢測試劑盒與AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（貨號：L00942）單血清型檢測試劑盒，檢測6例相同的AAV2樣本，相關性R2=0.9971。

• AAV2.7m8 樣本檢測案例
  

  圖3： 金斯瑞的AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）以及AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）均可以對改造的AAV2.7m8進行檢測。

• L01035 對不同血清型的檢測范圍

  表5：不同 AAV 血清型滴度測定的典型測定工作范圍

  Serotype	Typical assay working ranges (Capsids/mL)
  AAV1	2.73E+07 - 1.75E+09
  AAV2	1.32E+08 - 7.00E+09
  AAV5	6.30E+07 - 4.00E+09
  AAV6	3.91E+07 - 2.50E+09
  AAV8	6.27E+07 - 4.00E+09
  AAV9	1.09E+08 - 7.00E+09

  *表中各血清型工作范圍驗證選擇的材料，AAV2為金斯瑞自產的VLP（Virus-like particle），其余均為來自于Progen的Empty capsids。

  

  圖4： 不同AAV血清型滴度測定標準曲線的疊加圖
  AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（貨號：L01035）中的抗體原料對不同血清型的 AAV 的識別情況不同，因此在檢測不同血清型時，檢測工作范圍會有所不同。

• L00942 的檢測特異性
  

  圖5： 使用AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）檢測AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV8、AAV9樣本，能夠僅特異性檢測AAV2樣本，且不與其他測試樣本產生交叉反應。

常見問題解答

• 1. 試劑盒中是否提供陽性標準品？

  AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）提供AAV2標準品，該標準品為金斯瑞自產的VLP（Virus-like particle）。
  AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（貨號：L01035）僅提供AAV2標準品，不提供其他血清型的標準品。其他血清型的標準品需要用戶自行建立。

• 2. 如果沒有其他血清型的AAV陽性標準品，是否可以使用AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes？

  建議使用與樣品中 AAV 衣殼相匹配的陽性標準品，以生成準確的定量標準曲線。
  若用戶無法獲取AAV其他血清型標準品，推薦使用下方換算公式，即使用本試劑盒中的AAV2標準品建立標準曲線并測定樣本的濃度，再將測定濃度作為X帶入公式計算出對應血清型的滴度。表格中的公式已進行相關性驗證（該方法僅限粗略計算）。

  Serotype	Typical assay working ranges (Capsids/mL)
  AAV1	y = 0.2498x - 3E+07
  AAV5	y = 0.8306x - 2E+07
  AAV6	y = 0.3759x - 3E+07
  AAV8	y = 0.5314x - 4E+06
  AAV9	y = 0.4569x + 9E+07

• 3. AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes對不同AAV血清型的檢測范圍。

  本試劑盒已驗證對于AAV 血清型 1、2、5、6、8、9的適用性，典型的工作范圍可見下表：

  Serotype	Typical assay working ranges (Capsids/mL)
  AAV1	2.73E+07 - 1.75E+09
  AAV2	1.32E+08 - 7.00E+09?
  AAV5	6.30E+07 - 4.00E+09
  AAV6	3.91E+07 - 2.50E+09
  AAV8	6.27E+07 - 4.00E+09
  AAV9	1.09E+08 - 7.00E+09

  *表中各血清型工作范圍驗證選擇的材料，AAV2為金斯瑞自產的VLP（Virus-like particle），其余均為來自于Progen的Empty capsids。

  本試劑盒中的抗體原料還可識別AAV2.7m8，AAVDJ 和 AAVrh.1，但本試劑盒未對這三種血清型進行驗證。對于其他的 AAV 血清型，本試劑盒未進行驗證，但并不一定意味著它們無法被檢測到。用戶可以按照該試劑盒的方案來評估本品對其他血清型的適用性。

• 4. 一個試劑盒可以檢測多少個樣本？

  試劑盒中各配有一塊預包被的96孔酶標板，其中包含8 孔 x 12 板條，我們建議按照說明書中推薦的標準曲線稀釋梯度，配置8個標準品工作液。 為了確保滴度的可靠定量，建議標準品和樣品均一式兩份進行重復測試。由此可計算出，一旦應用了標準曲線，就可以得到40個重復的測量值。

• 5. 是否可以提供額外的洗液試劑？

  可單獨選購 20× Wash Solution (GenScript, B00063)，該洗液適用于本試劑盒。

• 6. 測值超出線性范圍是否有效？

  無效。需要調整稀釋倍數重新復測。

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