自擴(kuò)增RNA合成服務(wù)

更低RNA劑量，更高蛋白表達(dá)量
經(jīng)篩選與驗(yàn)證的復(fù)制酶元件與修飾，質(zhì)量穩(wěn)定

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新技術(shù)助攻mRNA疫苗與療法實(shí)現(xiàn)突破

自擴(kuò)增RNA（也稱為自復(fù)制RNA，saRNA）是一種可以在細(xì)胞內(nèi)編碼復(fù)制酶，并復(fù)制原始RNA鏈的mRNA。它具備多種與傳統(tǒng)mRNA類似的結(jié)構(gòu)，例如它是線性結(jié)構(gòu)的單鏈RNA分子，具有5'加帽、3'加尾、 5'和3'非翻譯區(qū)（UTRs）。但不同于傳統(tǒng)mRNA，基于自擴(kuò)增RNA自我復(fù)制的特性，其可以實(shí)現(xiàn)更小的給藥劑量，更低的副作用，更長(zhǎng)的表達(dá)時(shí)間。

金斯瑞提供定制化合成的自擴(kuò)增RNA和現(xiàn)貨自擴(kuò)增RNA產(chǎn)品，具備優(yōu)化的設(shè)計(jì)和修飾，從而保證mRNA的質(zhì)量和下游蛋白表達(dá)量，加速您創(chuàng)新項(xiàng)目的進(jìn)程。

IVT mRNA合成服務(wù)

金斯瑞自擴(kuò)增RNA的優(yōu)勢(shì)

經(jīng)篩選與驗(yàn)證的復(fù)制酶元件與修飾

整合固定元件的即用模板，加速交付
質(zhì)量穩(wěn)定，蛋白表達(dá)量更高

增強(qiáng)與延長(zhǎng)的蛋白表達(dá)能力

更少量的mRNA即可實(shí)現(xiàn)更強(qiáng)更持久的蛋白表達(dá)
支持mRNA應(yīng)用降本增效

多種載體支持多元化應(yīng)用

不同免疫原性的載體可選
精準(zhǔn)匹配不同下游應(yīng)用

自擴(kuò)增RNA的表達(dá)機(jī)制

不同類型mRNA的比較

	線性mRNA	自擴(kuò)增RNA	環(huán)狀RNA
示意圖
結(jié)構(gòu)	線性，開放5'和3'端，易被核酸外切酶降解	線性，開放5'和3'端，易被核酸外切酶降解	閉環(huán)結(jié)構(gòu)，無開放的5'端和3'端不易被核酸外切酶降解
核糖體招募	5'Cap: 啟動(dòng)翻譯，使mRNA更穩(wěn)定	5'Cap: 啟動(dòng)翻譯，使mRNA更穩(wěn)定	核糖體進(jìn)入位點(diǎn) (IRES): 啟動(dòng)翻譯
ORF	可進(jìn)行密碼子優(yōu)化提升蛋白表達(dá)量可進(jìn)行堿基修飾，例如M1Ψ 目標(biāo)序列長(zhǎng)度＜20kb	可進(jìn)行密碼子優(yōu)化提升蛋白表達(dá)量可進(jìn)行堿基修飾，例如m5C 目標(biāo)序列長(zhǎng)度＜6kb	可進(jìn)行密碼子優(yōu)化提升蛋白表達(dá)量目標(biāo)序列長(zhǎng)度＜4kb
UTR	5'端和3'端的UTR結(jié)構(gòu)提升mRNA的穩(wěn)定性，促進(jìn)mRNA翻譯	5'端和3'端的UTR結(jié)構(gòu)提升mRNA的穩(wěn)定性，復(fù)制酶促進(jìn)mRNA的自我復(fù)制	包含IRES+PIE+其他元件
PolyA尾	提升mRNA的穩(wěn)定性，避免mRNA降解	提升mRNA的穩(wěn)定性，避免mRNA降解	不需要
蛋白表達(dá)量	強(qiáng)+++	強(qiáng)+++++	強(qiáng)++++
蛋白表達(dá)半衰期	短	更長(zhǎng)	長(zhǎng)
免疫原性	低	高	中等
所需劑量	高	低	中等
創(chuàng)新性	傳統(tǒng)	新	更新

服務(wù)流程

密碼子/UTR優(yōu)化

每個(gè)基因都會(huì)進(jìn)行密碼子優(yōu)化，保證蛋白表達(dá)量
金斯瑞專利的密碼子優(yōu)化，結(jié)合＞200種影響因子進(jìn)行優(yōu)化

基因合成

支持100bp至6 kb目標(biāo)序列合成
基因合成周期快至6-14個(gè)工作日
專用的基因合成Poly(A)的載體

克隆/質(zhì)粒制備

即用型線性化質(zhì)粒，支持體外mRNA轉(zhuǎn)錄
載體含穩(wěn)定的Poly(A)結(jié)構(gòu)，長(zhǎng)度均一，誤差不超過±5-10nt

saRNA合成

定制化RUO級(jí)別saRNA制備
先進(jìn)的純化技術(shù)，多種QC可選

LNP遞送

通用可電離脂質(zhì)制劑
可荷載1-30mg saRNA

服務(wù)詳情

定制化saRNA合成服務(wù)

服務(wù)名稱	目標(biāo)序列長(zhǎng)度	交付量*	純化方式^&	載體#	修飾	溶劑	QC	saRNA 制備周期
自擴(kuò)增RNA	100bp - 6kb	100μg至200mg	LiCl	GS-saRNA-1 GS-saRNA-2	m5C或不修飾	Sodium citrate, pH6.5 (默認(rèn)0.5-2mg/ml)	研究級(jí)-標(biāo)準(zhǔn) 研究級(jí)-升級(jí)	快至2周

* 單批次交付量，總體交付量高達(dá)g級(jí)別
& 其他純化方式歡迎請(qǐng)?jiān)斣?br> # 不同載體匹配不同應(yīng)用

載體名稱	加帽類型	修飾類型	下游應(yīng)用
GS-saRNA-1	Cap-AU	m5C或不修飾	要求免疫原性比較低的應(yīng)用，例如：基因療法等
GS-saRNA-2	Cap-AG	m5C或不修飾	要求免疫原性比較高的應(yīng)用，例如：腫瘤/傳染病疫苗等

現(xiàn)貨saRNA產(chǎn)品

saRNA現(xiàn)貨產(chǎn)品	修飾	規(guī)格	濃度	溶劑	周期
eGFP / F-Luc / mCherry saRNA	m5C	50 / 100 / 200μg	1 mg/ml	1mM Sodium citrate, pH6.5	快至4天

QC詳情

QC	項(xiàng)目	檢測(cè)方式	檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)
鑒定	外觀	視覺觀測(cè)	澄清無異物 ?
	RNA長(zhǎng)度	毛細(xì)管電泳 (CE)	目標(biāo)長(zhǎng)度±30%
	RNA長(zhǎng)度	瓊脂糖凝膠電泳	檢測(cè)到目標(biāo)大小的條帶
	Poly(A)長(zhǎng)度	酶切法和CE	目標(biāo)長(zhǎng)度±30%
	RNA含量	紫外吸收	目標(biāo)含量±5% ?
	pH	pH計(jì)	目標(biāo)值±0.5
	緩沖液規(guī)格	按客戶提供詳情	N/A
純度	A260/280 ?	UV檢測(cè)	1.70 ~ 2.30
	加帽效率	LC-MS	≥ 90%
	純度	毛細(xì)管電泳 (CE)	≥ 70%
雜質(zhì)	內(nèi)毒素	半定量	< 10 EU/mg?

案例分享

LNP遞送saRNA，在HEK293細(xì)胞上蛋白表達(dá)量高

實(shí)驗(yàn)方法：將通過GS-saRNA-1 (低免疫原性載體) 或GS-saRNA-2 (高免疫原性載體) 兩種載體制備的eGFP saRNA (m5C修飾) 100ng，分別通過LNP和Lipofectamine MessengerMAX (Thermo Fisher) 轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，24小時(shí)和48小時(shí)后通過熒光顯微鏡觀察eGFP表達(dá)量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：金斯瑞兩種載體制備的eGFP saRNA均有顯著的eGFP表達(dá)，LNP遞送的組別表達(dá)量更高。
較之線性mRNA或環(huán)狀RNA，saRNA蛋白表達(dá)量更高

實(shí)驗(yàn)方法：將表達(dá)eGFP的200ng線性mRNA，200ng環(huán)狀RNA和100ng saRNA通過LNP轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：saRNA組的eGFP蛋白表達(dá)量更高。較之線性mRNA和環(huán)狀RNA，saRNA僅需1/2的質(zhì)量，或1/5的摩爾量即可達(dá)到更高的蛋白表達(dá)量。
較之常規(guī)saRNA，金斯瑞saRNA具有更高的蛋白表達(dá)量

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：金斯瑞saRNA基于GS-saRNA-1載體合成，m5C修飾，具有不同的經(jīng)過篩選驗(yàn)證的復(fù)制酶元件和修飾，與常規(guī)saRNA 比較，金斯瑞設(shè)計(jì)的GS-saRNA 具有更高的初始及持續(xù)蛋白表達(dá)量，表達(dá)量可以高達(dá)10倍。
較之友商saRNA，金斯瑞saRNA具有更高純度、更高的蛋白表達(dá)量、更低的免疫原性
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
- 圖1. 采用Agilent 5200毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)，較之友商saRNA，金斯瑞saRNA純度更高。
- 圖2. 將通過GS-saRNA-1 (低免疫原性載體) 或GS-saRNA-2 (高免疫原性載體) 兩種載體制備的eGFP saRNA (無修飾) 100ng，通過Lipofectamine MessengerMAX (Thermo Fisher) 轉(zhuǎn)染至HEK293T和A549細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24小時(shí)和48小時(shí)，通過熒光顯微鏡和酶標(biāo)儀檢測(cè)eGFP的表達(dá)量，金斯瑞saRNA的蛋白表達(dá)量更高。
- 圖3. 通過ELISA檢測(cè)A549細(xì)胞中的IL6水平，金斯瑞saRNA組IL6水平較低，免疫原性較低，其中，GS-saRNA-1免疫原性更低。