多肽熒光修飾
金斯瑞提供了大量的多肽熒光標(biāo)記，且種類還在不斷增加。下方列出了一些我們最常用的修飾：
| 名稱 |
激發(fā)波長（nm） |
發(fā)射波長（nm） |
發(fā)射顏色 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
| 7-甲氧基香豆素-4-乙酸 |
328 |
393 |
藍色 |
體外成像
亞細(xì)胞定位
共聚焦顯微鏡
流式細(xì)胞術(shù)
|
| FITC-Ahx |
494 |
521 |
綠色 |
| FAM |
495 |
520 |
綠色 |
| Cy3 |
555 |
570 |
黃色 |
| 5-羧基四甲基羅丹明（TMR） |
542 |
568 |
橙色 |
| Cy5 |
646 |
662 |
紅色 |
| Cy5.5 |
673 |
707 |
近紅外 |
體外成像
亞細(xì)胞定位
體內(nèi)光學(xué)成像
血管造影術(shù)
|
| Cy7 |
750 |
773 |
近紅外 |
FRET對
熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是一種描述兩種熒光團之間能量轉(zhuǎn)移的機制。由于FRET效率部分取決于供體分子和受體分子之間的距離，因此該技術(shù)通常用于研究酶的效率、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用或其他分子動力學(xué)（圖1）。
圖1. 用于蛋白酶研究的FRET機制。當(dāng)肽保持完整時，受體分子將淬滅供體分子，檢測不到熒光。如果肽序列被蛋白酶活性裂解，受體將不再淬滅供體，從而檢測到熒光信號。
以下是最常用的FRET對：
| 供體 |
受體 |
| 名稱 |
激發(fā)波長（nm） |
發(fā)射波長（nm） |
名稱 |
激發(fā)波長（nm） |
發(fā)射波長（nm） |
| Cy2 |
490 |
510 |
Cy3 |
555 |
570 |
| FITC |
494 |
521 |
TRITC |
557 |
576 |
| FAM |
495 |
520 |
Cy3 |
555 |
570 |
| FAM |
495 |
520 |
德克薩斯紅 |
589 |
615 |
| FAM |
495 |
520 |
Cy5 |
646 |
662 |
| Cy3 |
555 |
570 |
Cy5 |
646 |
662 |
| EDANS |
335 |
493 |
DABCYL |
453 |
- |
| Glu(EDANS)-NH2 |
335 |
493 |
DABCYL |
453 |
- |
| MCA |
328 |
393 |
DNP |
348 |
- |
| Abz |
330 |
420 |
DNP |
348 |
- |
| Abz |
330 |
420 |
Tyr (3-NO2) |
360 |
- |
用于亞細(xì)胞成像的熒光多肽
利用共焦顯微鏡或熒光顯微鏡進行體外成像仍然是研究細(xì)胞內(nèi)各種生物學(xué)過程和相互作用的最高效、最有效的方法之一。當(dāng)與成像技術(shù)結(jié)合時，熒光標(biāo)記多肽可用于識別特定靶標(biāo)。
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For example, cell penetrating peptides (CPPs) modified with FITC and photoactivatable probes have been used to track binding patterns and dynamic behavior over time. Unlike proteins, these peptides localize to specific targets on actin and are less prone to protein aggregation, making them ideal for in vitro tracking (Pan 2014). Similarly, FITC-labeled CPPs have been used to image intracellular compartments of cells with low risk of cytotoxicity (Kirkham 2015).
用于血管造影的熒光多肽
用于血管造影的體內(nèi)成像仍然是熒光標(biāo)記多肽的主要應(yīng)用領(lǐng)域。該技術(shù)使用造影劑對血管內(nèi)部進行成像，使醫(yī)生能夠為個人選擇最合適的醫(yī)療策略或治療方法。
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For example, high resolution near-infrared fluorophores have been used as fibrin imaging-agents for deep vein thrombosis (DVT). Using Cy7 labeled fibrin-targeting peptides, CT scanning and confocal microscopy were used to differentiate between acute and subacute murine DVT (Hara 2012). Similar techniques have also been used for detecting apoptosis as a symptom for glaucoma. Fluorophore-labeled peptides that are activated by caspases can be imaged in vivo to track glaucoma progression (Qiu 2014).
用于篩選蛋白水解肽的FRET
蛋白水解酶在傳染性疾病中發(fā)揮重要作用，使其成為開發(fā)新療法的研究目標(biāo)。為了識別這些酶靶向的肽序列，通常使用肽文庫。潛在的蛋白酶靶序列與FRET對結(jié)合在一起，這樣當(dāng)酶裂解靶肽時，可以檢測到熒光信號。
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In these studies, a donor molecule, such as Abz (Marcondes 2015) or Lucifer Yellow (Rossé 2000) is covalently attached to the C-terminus, while acceptor molecules (ex. Dabsyl, DNP) are coupled to the N-terminus. This strategy is commonly employed with peptides synthesized using a solid-phase approach, and peptides are left conjugated to the bead. If the peptides are not targeted by protease activity, both the donor and acceptor will be present, and the bead will appear non-fluorescent. If the peptides are cleaved, the peptide will no longer be quenched by FRET and the beads will fluoresce. Since protease studies are most effective when FRET is combined with shorter peptides, micro-scale peptide libraries are ideal choices for these experiments.
參考文獻
熒光修飾案例研究
熒光多肽標(biāo)記有許多研究應(yīng)用，金斯瑞在合成具有各種修飾的肽方面擁有豐富的經(jīng)驗。
案例研究1
序列：LYRLGLGH
修飾：MCA/DNP
數(shù)量：1-4 mg
>98% 17天 99.563% 14天
| 要求純度 |
預(yù)計交付時間 |
實際純度 |
實際交付時間 |
>98%
|
17天 |
99.563%
|
14天 |
案例研究2
序列：IKDLSKEERLWEVQRILTALKRKLREA
修飾：5-FAM (N端)
數(shù)量：10-14 mg
| 要求純度 |
預(yù)計交付時間 |
實際純度 |
實際交付時間 |
| >98% |
23天 |
99.10% |
13天 |
案例研究3
序列：RAKWNNTLKQIASK
修飾： FITC-Ahx (N端)
數(shù)量： 5-9 mg
| 要求純度 |
預(yù)計交付時間 |
實際純度 |
實際交付時間 |
| >98% |
17天 |
99.81% |
5天 |
