質(zhì)粒制備服務(wù)

質(zhì)粒制備QC項(xiàng)目詳解

金斯瑞質(zhì)粒制備系列服務(wù)默認(rèn)提供7項(xiàng)以上QC檢測，旨在為客戶提供高質(zhì)量，高標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)粒。常規(guī)QC項(xiàng)目包括限制性內(nèi)切酶酶切分析，殘留RNA檢測，殘留DNA檢測，內(nèi)毒素分析，免費(fèi)目標(biāo)基因序列測序，同時(shí)金斯瑞還提供精準(zhǔn)內(nèi)毒素含量測定，RNA消除等附加QC服務(wù)項(xiàng)目，靈活的選擇滿足客戶的定制化需求。

QC 項(xiàng)目	參考狀態(tài)	測定方法
超螺旋程度	高級(jí)別質(zhì)粒≥ 90%	瓊脂糖凝膠電泳密度測定
內(nèi)毒素測定	高級(jí)別質(zhì)粒≤ 0.005 EU/μg DNA	TAL 分析
插入序列全長測序	序列準(zhǔn)確	Sanger 測序
生物負(fù)載測定	72小時(shí)無生長	生物負(fù)載實(shí)驗(yàn)
限制性內(nèi)切酶分析	與預(yù)期大小一致	酶切后凝膠電泳分析
外觀	透明，無明顯顆粒	視覺觀測
A260/280	1.8-2.0	Nanodrop UV值測定
殘留RNA	凝膠電泳不可見	瓊脂糖凝膠電泳密度掃描
基因組DNA污染	基因組DNA＜質(zhì)粒條帶的15%	GIS灰度分析法
全長測序服務(wù)	序列準(zhǔn)確	Sanger 測序
Animal free RNA去除	無特定標(biāo)準(zhǔn)值	/
濃度	干粉、液體（默認(rèn)1mg/mL*，可根據(jù)需求調(diào)整濃度）	UV測定

注：*不同儀器的濃度讀數(shù)可能在-5%～+15%之間變化。

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分子生物學(xué)服務(wù)

常規(guī)問題解答

1. 什么是內(nèi)毒素，為什么我們要關(guān)注質(zhì)粒中的內(nèi)毒素殘留量？金斯瑞提供了哪些不同的選擇？

答：內(nèi)毒素是存在于細(xì)菌如大腸桿菌外膜中的脂多糖或脂聚糖，可以固定膜的完整性和保護(hù)細(xì)菌本身免受某些壓力，維持細(xì)菌結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。但若制備的質(zhì)粒中內(nèi)毒素殘留過高，會(huì)使其轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率降低，同時(shí)還可能造成動(dòng)物或人的免疫反應(yīng)進(jìn)而影響基因免疫療法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2. 什么是“控制內(nèi)毒素流程”和“內(nèi)毒素去除” ？

答： “控制內(nèi)毒素流程”是指嚴(yán)格控制在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中使用的試劑，材料使其不含內(nèi)毒素，但不保證細(xì)菌裂解過程中細(xì)菌本身釋放的內(nèi)毒素。“內(nèi)毒素去除”是指質(zhì)粒制備過程中的一個(gè)獨(dú)立步驟，該步驟使用化學(xué)試劑去除質(zhì)粒制備過程中產(chǎn)生的內(nèi)毒素。
3. 金斯瑞制備的質(zhì)粒其內(nèi)毒素殘留量是多少？

答：金斯瑞提供3種不同的質(zhì)粒制備服務(wù)，不同服務(wù)內(nèi)毒素含量水平也不相同。分子生物學(xué)質(zhì)粒制備未使用內(nèi)毒素控制流程，但嚴(yán)格控制質(zhì)粒制備操作手法，能盡可能的減少內(nèi)毒素的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒制備可確保內(nèi)毒素水平≤0.01 EU/μg，代表了當(dāng)今市場上質(zhì)粒制備較嚴(yán)格的內(nèi)毒素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。我們的高通量質(zhì)粒制備服務(wù)使用內(nèi)毒素控制流程，能確保制備的質(zhì)粒內(nèi)毒素水平<0.1 EU/μg，滿足細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)要求。
4. 什么是“Animal-free 培養(yǎng)基”？

答：Animal-free培養(yǎng)基是不含任何動(dòng)物來源成份的培養(yǎng)基。金斯瑞質(zhì)粒制備服務(wù)均使用Animal-free培養(yǎng)基。
5. 什么是“Animal-free質(zhì)粒制備流程”？

答：金斯瑞Animal-free 質(zhì)粒制備流程中不僅使用Animal-free培養(yǎng)基，同時(shí)在質(zhì)粒制備中不使用牛胰腺 RNase而是使用重組RNase，能確保制備的質(zhì)粒中沒有牛血清白蛋白成分殘留。使用Animal-free質(zhì)粒制備流程制備質(zhì)粒對(duì)避免臨床應(yīng)用和動(dòng)物研究的安全風(fēng)險(xiǎn)至關(guān)重要。
6. 為什么質(zhì)粒的超螺旋占比很重要？

答：多項(xiàng)研究表明，質(zhì)粒中超螺旋狀態(tài)的占比是眾多下游實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。例如，超螺旋可以強(qiáng)烈影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率和影響DNA治療中副作用的產(chǎn)生概率。超螺旋占比已被認(rèn)定為預(yù)測質(zhì)粒性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。