FAQ–His標簽蛋白的純化

• 每次使用都必須要再生層析柱嗎？

  不需要，每使用3-5次后再生層析柱即可。

• 使用手冊提到裂解平衡液、Wash Buffer和Elution Buffer中含有50mM NaH2PO4和300mM NaCl。可否用50mM PBS替代它們？

  不行，PBS的濃度較低，會導致一些非特異蛋白的結合。

• 細胞裂解和蛋白質純化需要多少濃度的PMSF？

  我們建議PMSF的終濃度為1 mM。

故障排除–His標簽蛋白的純化

故障排除–GST標簽蛋白的純化

故障排除–抗體純化

故障排除–免疫沉淀反應

eStain^?蛋白染色儀常見問題

• 1. 染色試劑是R250還是G250？

  R250

• 2. 藍、綠、白三個接口分別對應什么溶液？

  藍色：染色液，綠色：脫色液，白色：廢液

• 3. 濃縮脫色液凍住了怎么使用，會影響后續實驗嗎？

  用37℃水浴融化，充分搖勻后使用；當環境溫度較低時，建議打開空調保持室溫穩定

• 4. 使用1.5mm凝膠時，染脫色程序如何設置？

  推薦程序：eStain LG：染色3min，脫色2min、3min、3min；eStain L1：染色3.5min，脫色1.5min、3min、2min；不同1.5mm凝膠的配膠體系、濃度不同也可能導致結果不同，可根據實驗結果優化染脫色程序

• 5. eStain LG使用標準染脫色Stain程序（染色3min，脫色2min，脫色3min），想要染色效果更深一些，該如何設置程序？

  可以延長染色時間，如染色5min，脫色2min+3min；或者減少1個脫色循環，如：染色4.5min，脫色3min，但背景可能也會相對變深，需要根據實驗表現優化

• 6. 染色夾上的鐵片掉了影響染色效果嗎？

  不影響

• 7. 染色夾中間斷裂怎么辦？

  若染色夾網面無損壞，僅夾子中間連接處斷裂，一般不影響使用效果；如果損壞較嚴重，無法使用，可以購買凝膠固定夾配件自行組裝（Cat. No. L00767）

• 8. 儀器清潔維護的頻率及方法？

  染色夾維護：

  • 凝膠固定夾每使用50次，放入75 %乙醇中浸泡1-4小時（或者每900 ml 75 %乙醇中加入100 ml儀器清洗液母液浸泡），浸泡結束后使用蒸餾水沖洗、晾干；也可以每次使用完畢后浸泡在 75 %乙醇中，使用前用蒸餾水沖洗；
  • 當凝膠固定夾上的網上有褐色斑點，建議將凝膠固定夾放入1 M的NaOH溶液中，浸泡6-12小時左右，用軟毛刷進行清洗（請輕柔刷洗或觸摸，以防損壞網面），清洗后放入75 %乙醇浸泡1-4小時，浸泡結束后使用蒸餾水沖洗、晾干；

  eStain儀器維護：

  當通道染色100片凝膠時，需要用清洗液對通道以及管路進行清洗，操作步驟見eStain清洗試劑盒說明書（Cat.No. L00668）

• 9. 儀器開機后，主界面出現“Accumulated XXX run time exceeds maximum”怎么處理？

  按任意鍵解除，儀器可以繼續工作不影響使用；該提示可能是儀器PUMP、valve(1)、valve(2)、valve (3)、channel A、channel B部分使用壽命已經達到預定最大值，建議及時聯系工程人員確認是否需要維護，以免造成不必要的損失

• 10. 儀器開機后出現Incomplete program found怎么處理？

  開機檢測到在上次關閉儀器前有未完成的程序，安全起見，通道進行強制排液，因此無需任何操作，需等待儀器檢測運行結束，儀器將自動跳轉主界面。

eBlot? L1快速濕轉儀常見問題

• 1. eBlot? L1快速濕轉儀和傳統濕轉相比區別是什么？

  傳統濕法轉印耗時長、操作繁瑣；eBlot? L1快速濕轉儀基于濕轉的原理，集合了傳統濕轉穩定、均勻和半干轉快速、高效的優勢，同時避免了傳統濕轉耗時費力和半干轉不均勻穩定性差的缺點，儀器自帶三個預設程序，能夠在9-17分鐘內快速高效地實現蛋白從聚丙烯酰胺凝膠轉移到PVDF膜或NC膜上的過程。

• 2. 藍、綠、白三個接口分別對應什么溶液？

  藍色buffer1：轉膜液，綠色buffer2：冷卻液（推薦使用1%轉膜液或純水），白色：廢液。

• 3. eBlot? L1快速濕轉儀出廠默認程序有哪些？

  儀器中自帶三個預設程序，Short：2×5min，Standard：3×5min，Long：4×5min，Method 4清洗程序，Method 1-3出廠未設定，客戶可根據自身實驗情況設置

• 4. eBlot? L1的功率多大？

  400W

• 5. 海綿可以重復利用嗎？

  海綿使用后會變薄，可能導致三明治結構不緊條帶轉飄、儀器報錯等情況

• 6. 海綿上有很多氣孔，會對實驗結果有影響嗎？

  海綿上有小氣孔是正常的，不會影響實驗結果；如果出現氣孔完全穿透海綿的情況，請聯系售后：cpbu.techsupport@genscript.com

• 7. 轉膜后海綿下半部分浸濕了，上半部分是“干”的？

  轉膜過程中轉膜夾豎直放置，轉膜結束后，海綿上的液體受重力作用向下流淌，造成上半部分仍是干燥的錯覺，但實際上在轉膜過程中是充分浸潤的

• 8. 儀器開機后，主界面出現“Accumulated XXX run time exceeds maximum”怎么處理？

  按任意鍵解除，儀器可以繼續工作不影響使用；該提示可能是儀器PUMP、valve(1)、valve(2)、 valve(3)、channel A、channel B部分使用壽命已經達到預定最大值，建議及時聯系工程人員確認是否需要維護，以免造成不必要的損失

• 9. 儀器開機后出現Incomplete program found怎么處理？

  開機檢測到在上次關閉儀器前有未完成的程序，安全起見，通道進行強制排液，因此無需任何操作，需等待儀器檢測運行結束，儀器將自動跳轉主界面

• 10. 儀器清潔維護的頻率及方法？

  定時清潔維護儀器可以預防儀器報錯、吐泡等問題，延長儀器使用壽命；

  轉膜夾維護：每次轉膜完成后，用流水沖洗轉膜夾四面晾干保存； 建議1個月除銹一次，若夾子生銹嚴重可視情況增加除銹次數，將檸檬酸（192g檸檬酸或210g一水檸檬酸）溶解到 1L 純水中，配制成 1M 除銹劑，將夾子浸泡其中8 h或者過夜，用刷子除銹后，用水沖洗夾子晾干；

  eBlot? L1儀器維護：通道完成30片凝膠轉膜后，需要對通道和管路進行清洗，每次約5min；

  • 1) 同時按下 UP 和 SETTING 鍵直至蜂鳴器蜂鳴，儀器進行管路排空；
  • 2) 準備1L 0.1M NaOH溶液（4g NaOH溶于1L ddH2O）；
  • 3) 設定A通道和B通道運行程序：（操作步驟：在主界面長按SETTING直到蜂鳴器鳴叫，進入程序選擇界面，按UP/DOWN選擇Method 4程序，長按SETTING按鍵進入詳細參數界面檢查程序是否與下表一致，Buffer 1 cycles設定為4，每個循環設定為0 min，Buffer 2 cycles為0，Cooling cycles為0，First buffer為buffer 1，長按SETTING保存，儀器返回主界面，對應通道名稱顯示為Method 4，A、B兩通道都需設定）；

  程序名稱	程序內容
  Method 4	Buffer 1	4 times
  	Cycle 1	0min
  	Cycle 2	0min
  	Cycle 3	0min
  	Cycle 4	0min
  	Buffer 2	0 times
  	Cooling cycles	0 times
  	First buffer	Buffer1

  • 4) 將對應藍色進液管插入0.1 M NaOH溶液中；
  • 5) 在2個轉膜夾中分別放置2塊干海綿（放置2塊干海綿是清洗過程中不報錯的關鍵），將裝有海綿的轉膜夾分別插入儀器通道A和通道B中；
  • 6) 通道A和通道B同時運行清洗程序；
  • 7) 清洗程序運行結束后，同時按下UP、SETTING直至蜂鳴器蜂鳴，通道顯示倒計時，儀器進行管路排空；
  • 8) 將2個轉膜夾中的濕海綿換成2塊干海綿，分別插入儀器通道A和通道B中將進液管插入純水中，運行清洗程序（注意：如果沒有更換干海綿，可能有水外溢出來，請及時長按START終止程序；如果出現not enough buffer報錯，先單擊SETTING回到主界面，再單擊START，儀器重新進液；若再次出現not enough buffer報錯，先單擊 SETTING 回到主界面，再長按START終止程序，更換新的海綿，重新運行程序)；
  • 9) 清洗程序運行結束后，同時按下UP、SETTING直至蜂鳴器蜂鳴，儀器進行管路排空；
  • 10) 將進液管插到轉膜液瓶上，將程序改為正常轉膜程序，通道以及管路清洗工作完成。

  必要時可重復步驟2-7，進行1-3次清洗。

  長時間不使用儀器：如果長時間不使用儀器，請在連續運行2次管路排空操作(同時長按UP+SETTING)后斷開電源，并將轉膜液瓶蓋換為密封式瓶蓋，防止液體揮發。

  儀器搬動：儀器正常使用后，需要搬動儀器，請確定儀器開機后可以進入主界面，并確認通道內無液體，儀器搬動過程中，請確保儀器水平，防止通道或管路內殘余液體灑出。