HPLC純化的pegRNA (218nt)：分子量精準(zhǔn)
脫鹽純化的pegRNA (218nt)：分子量精準(zhǔn)
HPLC純化的pegRNA (218nt)：純度高達(dá) 92.78%
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Prime Editor（先導(dǎo)編輯器）具有無雙鏈斷裂、無需模板的優(yōu)勢，是更安全的基因敲除、敲入、突變方案。Prime Editor由Cas9-逆轉(zhuǎn)錄酶和pegRNA兩部分構(gòu)成。其中，pegRNA由引導(dǎo)序列（Spacer）、骨架序列（Scaffold），帶有編輯位點（Edit）的逆轉(zhuǎn)錄模板（RTT）、逆轉(zhuǎn)錄引物結(jié)合位點（PBS）組成。Cas9-逆轉(zhuǎn)錄酶會在pegRNA的引導(dǎo)下，精準(zhǔn)地切開靶標(biāo)DNA單鏈，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄模板，合成含有正確序列的DNA，完成基因編輯。
pegRNA長度一般在110nt以上，金斯瑞在化學(xué)合成長鏈RNA方面具有豐富的經(jīng)驗，可以供分子量精準(zhǔn)、純度高的產(chǎn)品，支持脫鹽與HPLC純化、200+種修飾及各種定制化需求。
Shawn Yang
Prime Medicine
I have been using GenScript to order customized critical reagents for an important assay. GenScript can always deliver materials efficiently with good quality. Their technical support is great to address any additional questions.
長達(dá)231 nt！支持脫鹽和HPLC級別
分子量精準(zhǔn)，純度高
批次間一致性好
經(jīng)驗證！基因編輯效率高
編輯效率可超過60%
默認(rèn)修飾提升編輯效率
一站式解決方案
提供PE2/PE3 mRNA
提供經(jīng)實驗驗證的操作指南
RUO至GMP級別的產(chǎn)品
全程支持您的項目從研發(fā)階段
走向臨床研究和IND申報
| 服務(wù)名稱 | 長度范圍 | 修飾* | 純化方式 | 交付量 | 報告 | 生產(chǎn)周期 （工作日） | 價格 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| pegRNA | 110-231 nt | 默認(rèn)修飾更穩(wěn)定 | 脫鹽 | 2-100nmol
干粉（默認(rèn)） TE buffer / Nuclease-free water（可選） |
MS和COA報告 (HPLC純化級別提供HPLC報告，純度≥85% #) |
7天起 | 歡迎詳詢 |
| HPLC純化 |
* pegRNA任意位置添加任意數(shù)量的常規(guī)2'-甲氧基，硫代修飾不額外收費，其他可提供200種+定制化修飾，請詳詢。
# 200 nt內(nèi)純度可以保證≥85%，200 nt以上請詳詢。
HPLC純化的pegRNA (218nt)：分子量精準(zhǔn)
脫鹽純化的pegRNA (218nt)：分子量精準(zhǔn)
HPLC純化的pegRNA (218nt)：純度高達(dá) 92.78%
實驗方法: HEK293T cells (0.2 x 106個細(xì)胞) ，電轉(zhuǎn)1μg PE2/PE3 mRNA, 30pmol nicking sgRNA和90pmo不同長度的pegRNA (HPLC純化) ，靶向HEK3位點。3天后提取基因組DNA，通過Sanger測序檢測基因編輯效率。
實驗結(jié)果： 添加 3'tevopreQ1 motif的pegRNA編輯效率可高達(dá)43.4%，遠(yuǎn)高于不加該結(jié)構(gòu)的pegRNA。
備注：218nt pegRNA是181nt pegRNA添加37nt tevopreQ1 motif 組成，據(jù)報道tevopreQ1 motif 可以幫助pegRNA的3'端不被核酸外切酶降解。 (Nelson, J. W. et al., 2022).
HPLC純化pegRNA (141nt) : 分子量精準(zhǔn)
HPLC純化pegRNA (141nt) : 純度高
實驗方法: HEK293T cells (0.2 x 106個細(xì)胞) ，采用電轉(zhuǎn)方式，以3：1的比例加入脫鹽或HPLC純化的pegRNA (141nt) 和nicking sgRNA，同時加入0.15 μg，0.25 μg，0.375 μg，0.5 μg，0.75 μg，1.0 μg的PE2/PE3 mRNA，靶向HEK3位點，敲除5bp堿基。3天后提取基因組DNA，通過Sanger測序檢測基因編輯效率。
實驗結(jié)果： HPLC 純化pegRNA編輯效率高達(dá)63.5%，脫鹽pegRNA編輯效率高達(dá)52.5%，編輯效率呈劑量依賴增長。
實驗方法: HEK293T 細(xì)胞 (0.2 x 106個細(xì)胞) ，以3：1的比例加入脫鹽或HPLC純化的pegRNA (141nt) 和nicking sgRNA，同時分別加入0.5μg、0.75μg、1.0μg的PE2/PE3 mRNA，靶向HEK3位點。3天后，檢測細(xì)胞毒性，相對細(xì)胞活性% = pegRNA加樣組細(xì)胞數(shù)量 / 空白組細(xì)胞數(shù)量。
實驗結(jié)果: 脫鹽或HPLC純化的pegRNA在45 pmol，67.5 pmol，90 pmol的濃度下對HEK293T細(xì)胞無明顯細(xì)胞毒性。
