hCCR-9兔單抗開發
目標：生成特異性識別7次跨膜蛋白hCCR-9的兔單克隆抗體
免疫原：hCCR9-mRNA-LNP復合物
篩選材料：hCCR9 過表達 CHO-K1 細胞系
挑戰：沒有可用的純化蛋白且DNA免疫嘗試失敗
結果：成功篩選到394個FACS 陽性hCCR9克隆，且最終選擇9個克隆進行交付
394個FACS 陽性克隆
選擇排名前20的克隆進行NGS測序, 選擇其中10個抗體進行重組表達和后續驗證
客戶選擇其中9個抗體作為最終交付并進行重組表達
經過兩輪hCCR9-LNP免疫后結果
重組表達克隆的FACS結果
| 克隆 # | Median (+) MFI | Median (-) MFI | Median (+) MFI/ Median (-) MFI |
|---|---|---|---|
| 27F8-1 | 22098 | 35 | 631.4 |
| 39D4-1 | 22031 | 35 | 629.5 |
| 31D7-1 | 21240 | 35 | 606.9 |
| 37F5-1 | 21964 | 36 | 610.1 |
| 39B9-1 | 20046 | 36 | 556.8 |
| 39B9-2 | 21698 | 34 | 638.2 |
| 20G5-1 | 3776 | 36 | 104.9 |
| 39F3-1 | 4674 | 41 | 114.0 |
| 60G5-1 | 14559 | 38 | 383.1 |
| 49B12-1 | 10867 | 38 | 286.0 |
| Positive control | 11763 | 42 | 280.1 |
9個重組表達終克隆的EC50結果
| 克隆 # | 27F8-1 | 31D7-1 | 37F5-1 | 39B9-1 | 39B9-2 | 39D4-1 | 39F3-1 | 60G5-1 | 49B12-1 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| EC50 | 0.118 | 0.126 | 0.143 | 0.133 | 0.114 | 0.128 | 1.561 | 0.113 | 0.345 |
| R square | 0.997 | 0.996 | 0.996 | 0.995 | 0.998 | 0.992 | 0.996 | 0.990 | 0.997 |
hCCR-9鼠單抗開發
目標：開發針對7跨膜蛋白hCCR9的小鼠單克隆抗體
免疫原：hCCR9-mRNA-LNP復合物
篩選材料：hCCR9 過表達 CHO-K1 細胞系
挑戰：沒有可用的純化蛋白且使用DNA免疫進行抗體開發失敗
結果：成功篩選到9個hCCR9陽性克隆和7個經過驗證的克隆 (客戶選擇)
1輪細胞融合
19 個FACS陽性母克隆
經過其他抗體驗證和NGS測序篩選出9個FACS陽性克隆
7個進行后續交付
Isotype identification of 9 hybridoma clones
| 亞型 | IgG1, k | IgG2a, k | IgG2b, k | IgG3, k |
|---|---|---|---|---|
| 克隆號 | 58D7, 69D11, 80E9 | 69C5 | 50C11, 50G8, 53B4, 56B3 | 77F5 |
FACS EC50 of 7 recombinant antibody
| 克隆號 | 50C11-1 | 50G8-1 | 53B4-1 | 58D7-1 | 69C5-1 | 77F5-1 | 80E9-1 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| EC50 | 0.7974 | 2.121 | 0.7245 | 0.1847 | 0.6506 | 0.4246 | 0.266 |
| R2值 | 0.9997 | 0.9996 | 0.9987 | 0.9922 | 0.9997 | 0.9808 | 0.9899 |
7個最終挑選克隆的FACS結果
陰性對照細胞
陽性過表達細胞
