非病毒細胞療法-CRISPR基因敲入優化試劑盒

快至3個工作日! sgRNA + Cas蛋白 + 單鏈/雙鏈敲入模板
節省75%經費! 驗證與優化非病毒細胞療法開發實驗

首頁 » CRISPR產品和服務 » 同源介導修復（HDR）基因敲入模板 » CRISPR基因敲入優化試劑盒

基于CRISPR技術的非病毒模式的細胞治療開發憑借其成本低，通量高和更安全的特點，逐漸受到更多關注，也為細胞治療商業化過程中，暴露出來的慢病毒載體短缺導致產能和推廣受限問題，提供了解決方案。

金斯瑞推出“非病毒細胞療法-CRISPR基因敲入優化試劑盒”，試劑盒包含sgRNA，Cas蛋白，單鏈/雙鏈敲入模板，用于驗證和優化T細胞，NK細胞，iPSC等細胞基因敲入效率，推進支持基于CRISPR技術敲入CAR，TCR等序列非病毒細胞治療開發，具有以下優勢：

高效的驗證優化

含EGFP或GFP報告基團，快速優化實驗體系、提升敲入效率

經濟快速的測試

現貨快至3個工作日，較之定制試劑節省75%經費

靈活的試劑組合

可選任意一個或多個組分

序列經優化與驗證

每個批次產品均經過驗證，敲入效率高達57%

CRISPR/Cas9基因編輯

試劑盒組分

化學合成sgRNA

HPLC純化的SafeEdit sgRNA
TRAC、RAB11A敲入位點可選

高純度Cas9蛋白

野生型（WTSpCas9）和增強型（eSpCas9）均可選擇

基因敲入(HDR)模板

單鏈ssDNA/共價閉合雙鏈dsDNA敲入模板可選
可添加CTS設計提升敲入效率

基因敲入增強劑（Enhancer）*

iPSC/T細胞等多種細胞，多個位點驗證
顯著提升敲入效率高達2.4倍

* 歡迎咨詢基因敲入增強劑（Enhancer），您可以聯系技術支持了解詳情或訂購，郵箱： oligo@genscript.com.cn ，電話：400-025-8686轉5812或5815。

試劑盒定制

1. 請選擇您需要的目的基因敲入位點:

TRAC : 適用于T細胞，常用的CAR序列敲入位點，sgRNA針對TRAC位點的第一個外顯子區域設計
RAB11A : 通用的管家基因，適用于T細胞、NK細胞、巨噬細胞、iPSC細胞等具有RAB11A 位點的更廣泛的細胞
備注 :其他位點請選擇定制化sgRNA 、基因敲入（HDR）模板合成服務

2. 請選擇您需要的基因敲入模板：

野生型Cas9蛋白 : 科研級，包含一個核定位信號（NLS）
特異性增加型eSpCas9-2NLS蛋白 : 通過在SpCas9 (K848A/K1003A/R1060A) 兩端增加核定位信號（NLS）去提升基因編輯的靶向特異性，更穩定，在提升編輯效率的同時可以降低10倍以上的脫靶效率¹

3. 請選擇您需要的基因敲入模板：

GenExact? ssDNA: 單鏈模板
GenWand? dsDNA: 雙端共價封閉雙鏈模板
GenEaxct? ssDNA和GenWand? dsDNA： 推薦同時選擇兩者，比較選擇合適您實驗體系的敲入模板類型

4. 您是否需要在您的基因敲入模板上增加CTS序列去提升敲入效率？
(CTS設計提升編輯效率的方案詳見文獻報告和案例分享，實驗操作詳見操作指南)

需要：CTS序列讓 RNP（Cas9+sgRNA）結合至敲入模板兩端，促進模板進入細胞核，提升敲入效率，單鏈模板需要配合退火引物使用
不需要

確認提交

試劑盒產品詳情

請查收您的定制化試劑盒，按照《金斯瑞的實驗操作指南》的推薦試劑劑量，可以用于約12個反應的實驗（Lonza 4D電轉平臺），或用于25個反應的實驗（Neon電轉平臺），您可以根據您的實驗體系和試劑用量增減產品數量，確保每個組分的交付量足夠支持您開展實驗。

貨號	產品名稱	數量
KIOK1-1.5	SafeEdit TRAC sgRNA - 1.5 nmol
KIOK1-3	SafeEdit TRAC sgRNA - 3 nmol
KIOK1-6	SafeEdit TRAC sgRNA - 6 nmol
KIOK2-1.5	SafeEdit RAB11A sgRNA - 1.5 nmol
KIOK2-3	SafeEdit RAB11A sgRNA - 3 nmol
KIOK2-6	SafeEdit RAB11A sgRNA - 6 nmol
KIOK3-100	Ultra eSpCas9 - 100 μg
KIOK3-200	Ultra eSpCas9 - 200 μg
KIOK3-400	Ultra eSpCas9 - 400 μg
KIOK4-100	Ultra WTSpCas9 - 100 μg
KIOK4-200	Ultra WTSpCas9 - 200 μg
KIOK4-400	Ultra WTSpCas9 - 400 μg
KIOK5	ssDNA_TRAC_EGFP - 50 μg
KIOK6	ssDNA_TRAC_EGFP_CTS - 50 μg
KIOK7	dsDNA_TRAC_EGFP - 50 μg
KIOK8	dsDNA_TRAC_EGFP_CTS - 50 μg
KIOK9	ssDNA_RAB11A_GFP - 50 μg
KIOK10	ssDNA_RAB11A_GFP_CTS - 50 μg
KIOK11	dsDNA_RAB11A_GFP - 50 μg
KIOK12	dsDNA_RAB11A_GFP_CTS - 50 μg
KIOK13	TRAC CTS Annealing Oligo - 2 nmol
KIOK14	RAB11A CTS Annealing Oligo - 2 nmol

備注：ssDNA選擇含CTS模板必須配套使用對應位點的退火引物，dsDNA本身即為雙鏈無需退火

您可以根據實際需求選擇加購以下產品：

貨號	產品名稱	數量
KIOK3-100	Ultra eSpCas9 - 100 μg
KIOK3-200	Ultra eSpCas9 - 200 μg
KIOK3-400	Ultra eSpCas9 - 400 μg
KIOK4-100	Ultra WTSpCas9 - 100 μg
KIOK4-200	Ultra WTSpCas9 - 200 μg
KIOK4-400	Ultra WTSpCas9 - 400 μg

參考文獻

1. Slaymaker, et al. Rationally engineered Cas9 nucleases with improved specificity. Science 351, 84–88 (2016).

2. Shy, et al. Hybrid ssDNA repair templates enable high yield genome engineering in primary cells for disease modeling and cell therapy manufacturing. bioRxiv 2021.09.02.458799.

技術資源

基因敲入優化試劑盒實驗操作指南

基因敲入實驗步驟與試劑比例
CTS序列實驗操作步驟
Enhancer使用步驟

免費下載免費下載

《UCSF基因編輯應用于細胞治療實例材料》

含CTS序列敲入模板如何提升基因編輯效率？

免費下載免費下載

常見問題

如何選擇合適的基因敲入（HDR）模板？
GenExact? ssDNA
精準敲入、毒性更低的單鏈模板

應用

細胞治療、KI細胞系/動物模型構建

優勢

細胞毒性低，特別適合T細胞編輯

精準敲入，脫靶效應低

純度高、經測序驗證

規格

敲入序列長度：150-5,000nt

μg to mg級交付量

科研至GMP級別

立即訂購
GenWand? dsDNA
支持長片段敲入的雙鏈模板

應用

長基因敲入、工藝放大/規模量產

優勢

兩端共價封閉、可實現高效精準敲入

適合長基因敲入、大規格更經濟

純度高、經測序驗證

規格

敲入序列長度：2-10kb

μg to g級交付量

科研至GMP級別

立即訂購
GenCircle? dsDNA
無抗性基因的小型環狀模板

應用

替代傳統質粒HDR模板，匹配申報合規性

特點

較之傳統質粒HDR模板，敲入效率提升高達30%

骨架僅429bp，毒性低，轉染效率高

刪除抗性標記與細菌源序列，規避耐藥風險與合規性相關風險

純度高、經測序驗證

規格

敲入序列長度：1-50kb

μg to g級交付量

GMP級別規劃中

立即訂購
CTS設計如何提升基因敲入序列？

UCSF Marson Lab 開發了一種含CTS設計的敲入模板，在兩端添加了Cas9蛋白靶向序列（CTS），兩端序列中互補的序列通過退火形成了雙鏈DNA。整個HDR模板中，待插入基因左右兩側為同源臂序列，同源臂序列外端為CTS序列，CTS包含PAM序列、gRNA序列和一段邊緣核苷酸序列。

通過這種設計，CTS可以讓RNP（Cas9+sgRNA）與敲入模板整合在一起進行電轉，促進其進入宿主細胞的細胞核，這種設計可以讓基因敲入模板更接近RNP的切割位點，從而提升目標基因插入效率。通過添加CTS設計，GMP適用規模的GenExact? ssDNA 在未添加增強劑的條件下，敲入效率可高達46.2%（圖3）。

訂購信息

郵箱

gene@genscript.com.cn

電話

400-025-8686分機5820
025-5889-7288分機5820

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