通用問(wèn)題

• 一般來(lái)說(shuō)，一抗的推薦工作濃度是多少？

  蛋白質(zhì)印跡測(cè)試：0.1-1 μg/ml
  IHC、ICC、FAC 和 IP 測(cè)試：1-5 μg/ml
  Elisa測(cè)試: 0.05-0.2 μg/ml

• 你們有主要為制藥企業(yè)設(shè)計(jì)的抗體產(chǎn)品嗎？

  有的，鏈接如下：

  THE? cAMP Antibody, mAb, Mouse

  THE? ADP Antibody, mAb, Mouse

  THE? PEG Antibody, mAb, Mouse

  Protein A ELISA Kit
• WB實(shí)驗(yàn)背景高的原因是什么？
  • 一抗?jié)舛瓤赡苓^(guò)高
  • 封閉不充分
  • 一抗存在非特異性吸附
  • 上樣樣量過(guò)大
  • 二抗?jié)舛瓤赡苓^(guò)高
• Western blot中的蛋白條帶與預(yù)測(cè)的蛋白分子量大小不同，可能的原因是什么?
  • 翻譯后修飾，如磷酸化、糖基化等，所有這些都可能增加蛋白質(zhì)的分子量。
  • 翻譯后切割：用于蛋白質(zhì)加工，即從前體切割成成熟活性形式，例如半胱天冬酶前體發(fā)生的情況。
  • 剪接變體：來(lái)自選擇性剪接的異構(gòu)體。
  • 相對(duì)帶電氨基酸組成（帶電氨基酸和不帶電氨基酸的比率）。
• 當(dāng)我用FACS分析細(xì)胞質(zhì)蛋白檢測(cè)時(shí)，結(jié)果是陰性的。 然而，通過(guò) Western Blot 分析時(shí)結(jié)果為陽(yáng)性，顯示條帶具有正確的分子量。可能的原因是什么？
  • 抗體工作濃度低。
  • 細(xì)胞膜未充分穿透。
  • 抗體孵育時(shí)間太短。
  • FACS檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)與熒光標(biāo)記抗體激發(fā)波長(zhǎng)不一致。
• 一般來(lái)說(shuō)，我應(yīng)該如何保存抗體？

  請(qǐng)仔細(xì)閱讀并遵循每種抗體產(chǎn)品說(shuō)明手冊(cè)上有關(guān)產(chǎn)品保存的內(nèi)容。

  通常，短期保存抗體應(yīng)在2-8℃保存，長(zhǎng)期保存則應(yīng)保存在-20℃。分裝儲(chǔ)存以避免反復(fù)凍融。

  以下抗體產(chǎn)品需要避光保存。

  THE? HA Tag Antibody [iFluor 555], mAb, Mouse

  THE? DYKDDDDK Tag Antibody [iFluor 647], mAb, Mouse

  THE? V5 Tag Antibody [iFluor 488], mAb, Mouse

  THE? His Tag Antibody [FITC], mAb, Mouse
• 你們?nèi)绾伪ＷC抗體的質(zhì)量？

  為了確保不同批次之間的抗體質(zhì)量，我們有嚴(yán)格的QA 放行，會(huì)比較不同批次之間的靈敏度和特異性。

• 我應(yīng)該使用單克隆抗體還是多克隆抗體？

  多克隆抗體

  多克隆抗體與單克隆抗體相比，多克隆抗體開(kāi)發(fā)相對(duì)較快且成本低廉。它們是非特異性的，因?yàn)樗鼈兡軌蜃R(shí)別抗原上的多個(gè)表位。

  優(yōu)點(diǎn)

  由于抗體將結(jié)合多個(gè)表位，因此可以幫助增強(qiáng)WB信號(hào)。

  由于可識(shí)別多個(gè)表位，多克隆抗體可以在IP/ChIP檢測(cè)中顯示更好的結(jié)果。

  更能容忍抗原的微小變化，例如多態(tài)性、糖基化異質(zhì)性或輕微變性。當(dāng)抗原的性質(zhì)未知時(shí)有優(yōu)勢(shì)。

  開(kāi)發(fā)成本低廉，工期短。

  缺點(diǎn)

  更容易出現(xiàn)批次之間的差異。

  多個(gè)表位使得可能存在潛在的交叉反應(yīng)。

  單克隆抗體

  優(yōu)點(diǎn)

  與多克隆抗體相比，單克隆抗體的均一性很高。

  如果保持實(shí)驗(yàn)條件不變，單克隆抗體的結(jié)果在實(shí)驗(yàn)間可重復(fù)性高。

  當(dāng)生產(chǎn)程序必須標(biāo)準(zhǔn)化，如臨床試驗(yàn)和治療時(shí)，所有批次都將是一致的，針對(duì)同一個(gè)抗原表位，這是一個(gè)特別的優(yōu)勢(shì)。

  單克隆抗體的高特異性降低了背景和交叉反應(yīng)，有助于提供可重復(fù)的結(jié)果，并確保親和純化的效率。

  特定性質(zhì)的抗體可以被識(shí)別和選擇，例如靈敏度要求和交叉反應(yīng)性水平可以被指定和篩選，以確定具有所需特性的細(xì)胞系。

  雜交瘤提供了一種永生細(xì)胞系，能夠產(chǎn)生無(wú)限數(shù)量的高特異性抗體。

  缺點(diǎn)

  抗體可能過(guò)于特異（例如，在多物種中檢測(cè)到的可能性較小）。

  通過(guò)化學(xué)方法處理抗原比多克隆抗體更容易受到表位丟失的影響。這可以通過(guò)將兩種或兩種以上的單克隆抗體混合來(lái)抵消。

  對(duì)于雜交瘤來(lái)說(shuō)，生產(chǎn)費(fèi)用昂貴，而且時(shí)間周期較長(zhǎng)。

表位標(biāo)簽抗體和The? Elite抗體

• 使用更亮的熒光基團(tuán)可以更好地檢測(cè)低豐度細(xì)胞上的分子嗎?

  熒光基團(tuán)的亮度和抗體的靈敏度是影響檢測(cè)靈敏度的兩個(gè)因素。The?Elite系列抗體在市場(chǎng)上的靈敏度是最好的。熒光團(tuán)越亮，整體檢測(cè)效果越好。GenScript公司的iFluor抗體是THE?Elite抗體系列偶聯(lián)了熒光化合物。與傳統(tǒng)的熒光染料相比，iFluor系列更明亮，穩(wěn)定性更好。

• 在流式檢測(cè)中，推薦使用哪個(gè)抗體來(lái)檢測(cè)極少量的His蛋白?

  GenScript有四種熒光基團(tuán)偶聯(lián)的His標(biāo)簽抗體用于FACS分析，包括A01620（FITC），A01800（iFluor488），A01801（iFluor555）和A01802（iFluor647）。iFluor系列因其比FITC結(jié)合抗體具有更高的靈敏度而被推薦用于FACS分析。以下是GenScript的iFluor抗體的波長(zhǎng)范圍：

  Cat. No.	Conjugate	Ex (nm)	Em (nm)
  A01800	iFluor 488	491	514
  A01801	iFluor 555	559	569
  A01802	iFluor 647	654	674

  根據(jù)我們的FACS分析結(jié)果，A01802（THE? His Tag Antibody [iFluor 647], mAb, Mouse）的靈敏度略高于A01800（THE? His Tag Antibody [iFluor 488], mAb, Mouse）。如果His Tag信號(hào)較低，建議使用A01802。

• 對(duì)于A00186（THE?His Tag Antibody, mAb, Mouse），免疫熒光的工作濃度范圍是什么？

  對(duì)于A00186，建議起始濃度為1 μg/ml。

• 我們正在使用你的ELISA試劑盒L00436（His Tag ELISA Detection Kit）和我們喜歡使用同樣的抗His單克隆抗體進(jìn)行western blot。L00436 ELISA試劑盒所用his抗體的貨號(hào)是哪個(gè)?WB的推薦濃度是多少？

  L00436 ELISA試劑盒中抗His 抗體的貨號(hào)為A00186。WB推薦使用濃度為0.1~0.2 μg/ml。

• 我需要一種兔抗的His標(biāo)簽抗體，希望它可以識(shí)別融合蛋白內(nèi)部的His標(biāo)簽。我想用這個(gè)抗體進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。我應(yīng)該使用哪種抗體？

  貨號(hào)A00174產(chǎn)品是兔抗His標(biāo)簽抗體。它已被測(cè)試用于內(nèi)部His標(biāo)簽的識(shí)別，但不能用于流式細(xì)胞術(shù)。

  對(duì)于流式細(xì)胞術(shù)，推薦使用以下抗體。它們都能識(shí)別融合在蛋白質(zhì)內(nèi)部的His標(biāo)簽。

  • A01620 THE? His Tag Antibody [FITC], mAb, Mouse
  • A01800 THE? His Tag Antibody [iFluor 488], mAb, Mouse
  • A01802 THE? His Tag Antibody [iFluor 647], mAb, Mouse
• 關(guān)于A01795（The? PEG Antibody, mAb, Mouse）的問(wèn)題

  • A01795（The? PEG Antibody, mAb, Mouse）能否識(shí)別PEG5？

    我們尚未對(duì)PEG5進(jìn)行測(cè)試。我們對(duì)PEG12進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果呈陽(yáng)性。我們的一位客戶對(duì)PEG2進(jìn)行了測(cè)試，并觀察到了良好的結(jié)果。

  • 能否將A01795（The? PEG Antibody, mAb, Mouse）用于親和柱？

    在大多數(shù)情況下，將抗體（IgG/IgM/IgY）與瓊脂糖樹(shù)脂結(jié)合是可以的。我們的PEG抗體可以用于這種偶聯(lián)。

  • 您是否有關(guān)于復(fù)溶后抗體穩(wěn)定性的信息？我擔(dān)心的是，IgM抗體可能在凍干過(guò)程中發(fā)生了片段化，或者在復(fù)溶過(guò)程中發(fā)生了聚集。

    如產(chǎn)品手冊(cè)所述，THE? PEG Antibody, mAb, mouse使用前應(yīng)以凍干形式保存。凍干形式在-20°C或更低溫度下可穩(wěn)定保存。重組抗體在2~8°C可保存2~3周，在-20°C及以下可保存12個(gè)月。請(qǐng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。

    用去離子水（或同等物質(zhì)）復(fù)溶凍干產(chǎn)品，使抗體濃度達(dá)到0.5 mg/ml。對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，建議在復(fù)溶的抗體溶液中添加甘油至終濃度為50%（v/v）。

• 我購(gòu)買(mǎi)了A01428-100（THE? DYKDDDDK Tag抗體[HRP], mAb, Mouse）。我想知道HRP的存在是否會(huì)干擾二抗（山羊抗小鼠二抗或Protein G二抗）的結(jié)合？

  在使用[HRP]標(biāo)記的一抗時(shí)，有一些變量可能會(huì)影響它與二抗的結(jié)合。

  • HRP造成的立體阻礙
  • 抗體的結(jié)合位點(diǎn)可能被HRP占據(jù)。因此，我們建議使用非偶聯(lián)抗體A00187 THE? DYKDDDDK Tag Antibody, mAb, mouse.

二抗常見(jiàn)問(wèn)題目錄號(hào)

• A00166（Goat Anti-Human IgG Antibody (H&L) [HRP], pAb）是否特異識(shí)別人IgG？它與非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物或嚙齒類(lèi)動(dòng)物有交叉反應(yīng)嗎？

  A00166（Goat Anti-Human IgG Antibody (H&L) [HRP], pAb）可識(shí)別人IgG，但尚未檢測(cè)與其他物種的交叉反應(yīng)。

• A00160（Goat Anti-Mouse IgG Antibody (H&L) [HRP], pAb）會(huì)與兔發(fā)生交叉反應(yīng)嗎？

  尚未檢測(cè)A00160（ Goat Anti-Mouse IgG Antibody (H&L) [HRP], pAb）與兔子的交叉反應(yīng)。

一抗常見(jiàn)問(wèn)題抗體

• A01622（GAPDH Antibody, mAb, Mouse）能識(shí)別哪些物種的GAPDH？

  A01622的免疫原是來(lái)自紅細(xì)胞的人GAPDH蛋白。A01622可檢測(cè)人、豬、牛、羊和魚(yú)GAPDH的內(nèi)源性水平。本產(chǎn)品尚未針對(duì)其他物種進(jìn)行檢測(cè)。A00191（GAPDH Antibody, pAb, Goat）可與人、小鼠、大鼠、山羊、兔、雞、倉(cāng)鼠、牛、豬、魚(yú)和大腸桿菌的細(xì)胞和組織裂解液中的GAPDH發(fā)生特異性反應(yīng)。

• 關(guān)于A01090 PIN1兔抗的問(wèn)題

  • 目的蛋白的分子量約為18 kDa，為什么WB檢測(cè)圖片中的條帶接近60 kDa。

    測(cè)試的目標(biāo)蛋白是57 KDa，因?yàn)樗侵亟M蛋白，而不是分子量為18 KDa的天然蛋白。

  • 融合伴侶是什么？

    從COA文件中可以看到，該蛋白的融合伴侶是calbindin、Trx標(biāo)簽和Strip-Ⅱtag。

  • 融合伴侶與PIN1之間是否存在交叉反應(yīng)？

    根據(jù)多序列比對(duì)結(jié)果，該重組蛋白中只有一個(gè)序列與用于免疫的多肽抗原相同。根據(jù)這些結(jié)果，融合伙伴與PIN1之間應(yīng)該沒(méi)有交叉反應(yīng)。

  • PIN1與其伴侶是如何融合的？

    PIN1在N端與其伴侶融合。