CRISPR gRNA數(shù)據(jù)庫

金斯瑞提供超20,000種含有g(shù)RNA序列的plentiCRISPRV2質(zhì)粒，所有sgRNA序列已經(jīng)被MIT驗證。在數(shù)據(jù)庫中，您可通過搜索基因名稱，基因標(biāo)志或ID來查找相關(guān)gRNA。

為滿足您多種需求，金斯瑞不僅提供多種Cas9類型的定制質(zhì)粒，也提供經(jīng)由MIT驗證的空載供您選擇。

一、定制質(zhì)粒類型

根據(jù)Cas9類型，定制質(zhì)粒包含如下幾種：

1. 增強CRISPR/SpCas9質(zhì)粒-eSpCas9^New

特異性增強SpCas9（Enhanced specificity SpCas9，eSpCas9），指的是SpCas9（K848A/K1003A/R1060A），是經(jīng)過MIT張鋒實驗室特異性改造的質(zhì)粒（Slaymaker et al. 2016）.eSpCas9可以降低脫靶效率，比自然SpCas9脫靶效率降低10倍之多，同時可實現(xiàn)基因高效編輯。

Cas9基因組編輯依賴于DNA雙鏈的分離。sgRNA與非靶向DNA序列的不匹配可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合和分裂。為了提高基因組編輯的特異性，科學(xué)家開發(fā)了突變?yōu)镵848A、K1003A和R1060A的eSpCas9。在SpCas9的非靶鏈溝槽內(nèi)中和這些帶正電荷的殘基，既可以減少非靶結(jié)合，也可以刺激靶向結(jié)合，這一操作需要更嚴(yán)格的Watson-Crick堿基配對。

2. SpCas9質(zhì)粒^Hot

Cas9內(nèi)切酶是基因編輯的研究標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)與單導(dǎo)RNA（single guide RNA，sgRNA）序列結(jié)合時，這些酶在基因組中產(chǎn)生位點特異性雙鏈斷裂（double strand breaks，DSBs）。

• SpCas9/sgRNAs可以在all-in-one載體中表達(dá)，也可以在dual載體中單獨表達(dá)。
• 優(yōu)選的靶上SpCas9 PAM序列為NGG。
• SpCas9還包含NGA序列的目標(biāo)親和力。

3. SpCas9 Nickase質(zhì)粒

SpCas9 nickase（Cas9n D10A）包含一個突變，不同于SpCas9切割時形成DSB，SpCas9 nickase在切割序列時形成單鏈缺口。經(jīng)過SpCas9 nickase切割后，兩個相對的gRNA序列可以有效配對，因為這種方法可以避免不必要的插入。

4. SaCas9質(zhì)粒

黃色葡萄球菌Cas9同源體（Staphylococcus aureus Cas9 orthologue，SaCas9）是腺相關(guān)病毒（adeno-associated virus AAV AAV）應(yīng)用的理想內(nèi)切酶。SaCas9比SpCas9大約短1kb，這允許了在AAV組裝時更加靈活。AAV載體較低的免疫原性，使SaCas9非常適合于體內(nèi)編輯的。

• 優(yōu)選的靶SaCas9 PAM序列為NNGRRT。
• SaCas9對NNGRRN也有很高的親和性。

5. 轉(zhuǎn)錄激活（Transcription Activation，SAM）質(zhì)粒

CRISPR/Cas9協(xié)同激活介質(zhì)（SAM）系統(tǒng)已被設(shè)計用于激活下游目標(biāo)的轉(zhuǎn)錄。SAM系統(tǒng)使用三種不同的激活因子，VP64、P65和HSF1，它們被組裝到催化失活的Cas9（dead Cas9，dCas9）復(fù)合物上驅(qū)動轉(zhuǎn)錄。

• SAM復(fù)合物由三個組分組成：一個由兩個MS2 RNA適配體組成的gRNA、一個催化失活的dCas9-VP64融合蛋白，和一個MS2-p65-hsf1激活因子融合蛋白。
• SAM系統(tǒng)能夠激活編碼和非編碼的元素。
• 查找經(jīng)由MIT驗證的SAM gRNA序列，請前往gRNA數(shù)據(jù)庫。

二、空載服務(wù)

為滿足您的科研需要，金斯瑞提供空載服務(wù)，載體序列已經(jīng)由MIT驗證。這些載體包含一個17bp-1.8kb的可表達(dá)連接體，以代替定制的sgRNA序列，您可根據(jù)需要對其進(jìn)行修改。