具有多種修飾的序列可能難以合成和純化，這取決于修飾的類型和位置。例如，如果需要修飾的氨基酸接近C端，則需要磷酸化的序列可能因隨后添加的氨基酸發(fā)生副反應。為避免合成過程中的副反應并提高純化過程中的分離效率，金斯瑞開發(fā)了使用混合柱樹脂提高分離效果的方法，以及使用高效偶聯(lián)試劑提高合成效率的方法。該方法大大縮短了周轉時間并提高了肽產(chǎn)量。

• 磷酸化多肽

  磷酸化多肽分為兩種：單磷酸化多肽和多磷酸化多肽。多磷酸化多肽由于高酸度，在Fmoc固相肽合成期間會降低活化速度，因此很難合成。金斯瑞開發(fā)了兩種可靠的磷酸化肽合成策略。

  第一種是使用單芐基磷酸化氨基酸和Fmoc化學直接分步固相合成磷酸肽。該策略有兩個棘手步驟：bzl-pAA的偶聯(lián)和下一個AA的偶聯(lián)。為了完成這些步驟，金斯瑞應用微波技術偶聯(lián)bzl-pAA。該策略使磷酸肽合成與常規(guī)固相合成一樣簡單。

  金斯瑞還采用全局磷酸化方法，該方法是在固相體載體上對未保護的羥基進行“保護”后磷酸化。合成后，所有需要磷酸化的殘基可在液相中一步完成磷酸化。該方法的優(yōu)點是避免了直接合成bzl-pAA的困難。

  案例研究1

  序列：Thr- .........-pTyr- .........-pTyr-pTyr- .........-Lys

  單擊此處查看HPLC結果 單擊此處查看MS結果

  

  案例研究2

  序列：XXX…XX{PSer}XX…XX{PSer}XXXX

  長度：30 AA；M.W.：3.4 kDa

  純度：>85%

  單擊此處查看HPLC結果 單擊此處查看MS結果

  

  案例研究3

  序列：XX…{PSER}XX…XX{PSER}X…X{PTHR}XX

  長度：47 AA；M.W.：5.6 kDa

  純度：>90%

  單擊此處查看HPLC結果 單擊此處查看MS結果

  

  案例研究4

  序列：XX…{PTYR}X…X{PTYR}…{PTYR}…XX

  長度：25 AA；M.W.：3.3 kDa

  純度：>85%

  單擊此處查看HPLC結果 單擊此處查看MS結果

  

  案例研究5

  序列：XXXX{pSER}X{pSER}XX…XX{pSER}XXXXX

  長度：23 AA；M.W.：2.6 kDa

  純度：>90%

  單擊此處查看HPLC結果 單擊此處查看MS結果

  

  交付質量標準：

  周轉時間：

  5-7個工作日

  交付：

  管裝多肽

  檢驗報告（COA）

  MS報告

  HPLC報告

  CGE報告

• 多二硫鍵多肽

  合成含有多個二硫鍵的肽具有挑戰(zhàn)性。這是因為任何含有多個半胱氨酸的多肽可隨機形成多個二硫鍵。全球很少有公司提供多二硫鍵多肽合成。然而，金斯瑞已經(jīng)開發(fā)了兩種方法來合成含有多個二硫鍵的多肽。

  第一種方法是分步氧化法，在Fmoc SPPS合成工藝期間使用不同保護基團保護每對半胱氨酸。使用不同的脫保護條件對各保護基團進行脫保護。根據(jù)客戶項目的具體需求精心選擇這些條件。隨后在液相中逐步氧化二硫鍵，我們可以高精度地合成含有兩個以上二硫鍵的多肽。

  第二種方法需要在液相中對肽的所有半胱氨酸進行單步氧化，以形成含有多個天然二硫鍵的多肽。隨后采用酶解確定二硫鍵的位置。

  案例研究1

  序列：H -Cys- Asn -Cys- .........-Cys- .........-Cys- .........- NH2

  二硫鍵：1-11，3-15

  單擊此處查看HPLC結果 單擊此處查看MS結果

  

  案例研究2

  序列：

  二硫鍵：16-15，8-13

  長度：18 AA；M.W.：2.2 kDa

  純度：>98%

  單擊此處查看HPLC結果 單擊此處查看MS結果

  

  案例研究3

  序列：

  二硫鍵：1-6，2-10，5-13）

  長度：14 AA；M.W.：1.5 kDa

  純度：>90%

  單擊此處查看HPLC結果 單擊此處查看MS結果

  
• 多甲基化多肽

  代表組蛋白尾端的單甲基化、二甲基化和三甲基化多肽可用于研究組蛋白與修飾它們的酶之間，或組蛋白與結合其修飾結構的酶之間的蛋白質-蛋白質相互作用。與多磷酸化肽一樣，多甲基化多肽也難以合成和純化。下文是金斯瑞合成的多甲基化序列的示例。此外，金斯瑞可以將甲基化與任何其他修飾（如乙?；驘晒鈽擞洠┙Y合起來。

  序列	長度	純度
  XXXLys(Me) … XXX	21	>90%
  XXXLys(Me3)XXX… XXX	18	>98%
  XXXLys(Me2)XXX… XXX	18	>98%
  XXXLys(Me3)XXXLys(Me3)XXXXXX	15	>98%
  XArg(me2s)XXXXXXLys(Me3)XXXXXX	15	>90%
  XArg(me2a)XXXXXXLys(Me3)XXXXXX	15	>90%
  XXPTHRLys(Me2)XX…XX	12	>95%
  XXPTHRXX…XX	12	>95%
  XXXXXXXXXXLys(Ac)XX … XXLys(biotin)	22	>90%
  XXXLys(Me3)XX… XXLys(5-FAM)	18	>95%

  交付質量標準：

  周轉時間：

  5-7個工作日

  交付：

  試管裝所需的寡核苷酸

  檢驗報告（COA）

  MS報告

  HPLC報告

  CGE報告