產品亮點

超高的靈敏度

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產品檢測靈敏度LoB=0.14 ng/ml, LoQ=0.5 ng/ml

準確性好

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• 回收率80%-120%，檢測數據準確，受基質影響小
• 精密度好，批內和批間CV<10%

標準品可靠

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內含國家標準品，定標準確

穩定性好

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有效期大于12個月

產品列表

檢測原理

• BSA ELISA試劑盒

  金斯瑞BSA ELISA試劑盒利用了兩種抗牛血清白蛋白（BSA）的抗體，它們可與BSA的不同表位結合。

  當標準品或樣品加入捕獲板時，BSA蛋白可以被包被在捕獲板上的抗BSA抗體捕獲。然后在體系中加入與生物素結合的抗BSA檢測抗體，該檢測抗體可以與捕獲板上結合的BSA相互作用。隨后添加的鏈霉親和素-辣根過氧化物酶偶聯物 (Streptavidin-HRP) 可與生物素偶聯的抗BSA抗體 (Biotin Anti-BSA Antibody) 相互作用。在洗滌步驟后，加入 3,3‘,5,5’-四甲基聯苯胺溶液（TMB溶液），可在體系中形成藍色復合物。通過添加終止溶液終止反應。終止溶液可使的體系顏色從藍色變為黃色。顏色的強度可以通過酶標儀在 450 nm和650 nm處讀取。測試樣品中BSA的濃度可根據BSA標準曲線實現精準定量。

  

  圖 1. BSA ELISA試劑盒檢測原理

驗證數據

• 高準確度和回收率

  回收率用于確定分析物檢測是否受樣品基質差異的影響，通過將已知量的分析物加標到不同的樣品基質中來驗證回收率。以下是根據具有代表性的準確度驗證生成的報告和數據示例，在這項驗證中，使用3批次試劑盒（GenScript，L00976），將20 ng/mL的分析物加標到基質中混合驗證回收率，樣本重復測量3次。

  表 1. 三批次試劑盒回收率測試結果

  批次	重復次數	平均測值（ng/mL）	回收率
  			實測
  #1	3	20.21	101%
  #2	3	19.42	100%
  #3	3	18.44	111%

• 高批內批間精密度

  A. 批內精密度/重復性

  批內精密度驗證體現測定板內每孔之間的重復性，有助于確保在測定板的不同孔中運行樣本檢測可以給出可靠的結果。
  以下是根據具有代表性的批內精密度驗證生成的報告和數據示例，在這項驗證中，使用試劑盒（GenScript，L00976）分別對低、中、高3個濃度水平的樣本進行測試，每個樣本各重復檢測10次，計算變異系數(CV)。

  B. 批間精密度

  批間精密度體現同一樣品在多批測定間的重現性，有助于確保在不同批次試劑盒中運行樣本檢測可以給出可靠的結果。
  以下是根據具有代表性的批間精密度驗證生成的報告和數據示例，在這項驗證中，使用3個不同批次試劑盒（GenScript，L00976）分別對低、中、高3個濃度水平的樣本進行測試，每個樣本各重復檢測10次，每個樣本計算30次，測量濃度結果和變異系數(CV)。

  表 2-1. 三批次試劑盒批內精密度驗證結果

  批次編號	重復次數	平均測值（ng/mL）	%CV
  			實測
  #1	10	2.03	5%
  #1	10	14.07	5%
  #1	10	21.47	5%
  #2	10	2.06	8%
  #2	10	15.36	10%
  #2	10	23.34	9%
  #3	10	2.09	8%
  #3	10	13.45	8%
  #3	10	21.42	8%

  表 2-2. 三批次試劑盒批間差驗證結果

  批次數量	重復次數	平均測值（ng/mL）	%CV
  			實測
  3	3x10	2.1	7%
  3	3x10	14.3	9%
  3	3x10	22.1	8%

• 線性

  線性是相對于基于標準曲線計算的分析物量定義的。線性驗證實驗提供了樣本在不同稀釋水平下測試的精度信息，有助于確保在分析的動態范圍內試劑盒能夠準確測量分析物濃度。
  以下是根據具有代表性的線性驗證生成的報告和數據示例，在這項驗證中，對樣本稀釋至測定范圍，使用試劑盒（GenScript，L00976）對其進行測定，每個樣本重復檢測3次，計算其濃度的平均值，將結果的平均值和理論值進行直線擬合，并計算線性相關系數r。

  表 3. 試劑盒線性驗證結果

  重復次數	預期理論值 （ng/mL）	平均測值 （ng/mL）	測值/預期 %	線性 r
  3	2	2.24	112%	＞0.999
  3	3.15	2.92	93%
  3	6.25	7.27	116%
  3	13.5	12.65	94%
  3	25	22.47	90%

• 專屬性

  向中濃度樣本及空白基質中添加不同濃度的HSA(人血清白蛋白)，考察方法的專屬性。上表是使用BSA ELISA檢測試劑盒(貨號:L00976)，根據具有代表性的交叉干擾驗證生成的數據示例。結果顯示，20 mg/mL的HSA對檢測不會造成明顯影響。

  表 4. 試劑盒特異性驗證結果

  加標HSA 濃度 (mg/mL)	BSA 理論測值 (ng/mL)	BSA 實際測值 (ng/mL)	回收率 (%)
  20	8	6.5	81
  10	8	6.8	83
  1	8	7.7	96
  0.1	8	8.5	107

• 鉤狀效應

  鉤狀效應是指在一定的濃度范圍內，分析物的濃度與檢測信號值呈正比，但當分析物超過某一濃度界限后，信號值反而隨著濃度的增高而下降的現象。以下是根據具有代表性的鉤狀效應生成的報告和數據示例，在這項驗證中，使用3批次試劑盒（GenScript，L00976）對其測定出現鉤狀效應的濃度限。

  表 5. 試劑盒鉤狀效應（Hook效應）驗證結果

  批次編號	濃度限（μg/mL）
  #1	35
  #2	30
  #3	30

  圖 2. 當樣本p24濃度高至 30,000 ng/mL (30 μg/mL) 時才開始出現HOOK效應

  

常見問題解答

• 如何避免BSA污染？
  • 向酶標板中加入每種試劑時，都應懸空加入，以防止移液器吸頭插入造成污染。
  • 確保實驗操作環境、離心管和移液器吸頭沒有BSA污染。過濾式移液器吸頭可以有效防止BSA污染。
  • 在BSA檢測中，每次洗滌后使用的吸水紙用后都需要丟棄，更換新的吸水紙以備下次洗滌后使用，以避免BSA污染。
  • 由于本實驗存在潛在的污染風險，操作人員必須特別小心。如果手套接觸到其他實驗的試劑，則必須在進行該BSA檢測之前更換手套以防止污染。

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