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His標(biāo)簽蛋白純化填料

• 表. His標(biāo)簽蛋白純化選擇指南

  產(chǎn)品名稱	配基	基質(zhì)	動(dòng)態(tài)載量	產(chǎn)品編號	應(yīng)用
  High Affinity Ni-TED Resin FF	TED	6%瓊脂糖	10mg/ml	L00885 New	重力柱純化&儀器純化，純度高，化學(xué)試劑耐受性更強(qiáng)
  High Affinity Ni-Charged Resin FF	NTA	6%瓊脂糖	≥50mg/ml	L00666 Hot	重力柱純化&儀器純化，載量很高，純度很高，性價(jià)比高
  Ni-NTA Resin	NTA	4%瓊脂糖	>20mg/ml	L00250	重力柱純化，載量較高，純度較高
  Ni Resin FF	IDA	6%瓊脂糖	>40mg/ml	L00465	重力柱純化 & 儀器純化，載量較高，成本較低
  Ni-IDA Resin	IDA	4%瓊脂糖	20mg/ml	L00223I	重力柱純化，載量高，成本很低

• 應(yīng)用案例1.L00666

  High Affinity Ni-Charged Resin FF（L00666）是一種6%高交聯(lián)瓊脂糖基質(zhì)，共價(jià)偶聯(lián)螯合劑NTA，通過四個(gè)配位鍵結(jié)合Ni2+，高親和性純化多組氨酸標(biāo)記的重組蛋白。High Affinity Ni-Charged Resin FF具有低的Ni2+泄漏，高的蛋白質(zhì)結(jié)合能力和穩(wěn)定性，并可耐受蛋白質(zhì)純化中多種化學(xué)試劑。這使得Ni-NTA填料成為了純化6x His標(biāo)簽融合蛋白的最佳選擇。

  1、實(shí)驗(yàn)條件

  • 儀器：蠕動(dòng)泵，玻璃層析柱
  • 樣品：Recombinant Protein A in E.coli extract（目的蛋白分子量：34KD）
  • 樣品體積：21L大腸桿菌裂解液（菌泥來自70L*2發(fā)酵罐）
  • 柱體積：約4.1L（D：200mm；H：13.1cm）
  • 平衡：60 mM NaH₂PO₄, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0；流速500ml/min，5倍柱體積
  • 上樣：60 mM NaH₂PO₄, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0；流速500ml/min
  • 洗雜：60 mM NaH₂PO₄, 300 mM NaCl, 10-20 mM imidazole, pH 8.0；流速700ml/min，10倍柱體積
  • 洗脫：60 mM NaH₂PO₄, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0；流速500ml/min
  • 溶液置換：透析或超濾至1*PBS溶液中

  2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

  

  圖1. L00666純化測試SDS-PAGE分析圖

  實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明：Ni-NTA純化載量高，結(jié)合力強(qiáng)，純度高

• 應(yīng)用案例2.L00885

  High Affinity Ni-TED Resin FF（L00885）是一款新型的固定化金屬螯合層析（IMAC）填料，是將TED偶聯(lián)至6%瓊脂糖凝膠介質(zhì)上，通過五個(gè)配位鍵螯合Ni2+離子。該填料主要用于捕獲和純化分泌到真核表達(dá)培養(yǎng)基上清中的組氨酸標(biāo)簽（His-tag）蛋白。與其它螯合劑填料相比，High Affinity Ni-TED resin具有更強(qiáng)的組分兼容性，可以在含有一定濃度的EDTA及DTT的情況下進(jìn)行目的蛋白的高效純化。

  

  實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明：Ni-TED對化學(xué)試劑的耐受性強(qiáng)