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選型指南

金斯瑞開發了兩種不同類型的Anti-AAV抗體。
第一種Anti-AAV抗體可識別特定AAV病毒顆粒構象表位，適用于Dot blot快速檢測病毒載體表達水平和Sandwich ELISA定量分析AAV物理滴度。

我們提供經過預驗證的即用型抗體對，方便您的研究。

第二種Anti-AAV抗體可識別三種 AAV 衣殼蛋白 VP1、VP2 和 VP3 的線性表位。這類抗體適用于Western Blot分析，可用于評估 AAV 生產中 VP1/VP2/VP3 的表達水平，或鑒定 AAV 生產和純化過程中衣殼蛋白的存在。

應用數據

• 衣殼蛋白VP1, VP2, VP3鑒定

  AAV 衣殼由三種衣殼蛋白VP1、VP2 和 VP3 以 1:1:10 的比例總共 60 個拷貝組成。 VP1、VP2、VP3的表觀分子量分別為87kDa、73kDa、62kDa。衣殼蛋白對細胞轉導效率至關重要。 VP2和VP3不足被認為是無效包裝的主要原因。過量的 VP3 可能會降低轉導效率。三種衣殼蛋白比例的優化在 AAV 生產過程中至關重要。聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE) 和蛋白質印跡 (WB) 是在重組 AAV 生產過程的初始優化和質量控制過程中檢測 VP1、VP2 和 VP3 蛋白組成的有效方法。 GenScript 提供Anti-AAV 抗體用于表征衣殼蛋白 VP1、VP2 和 VP3（圖 1 和 2）。

  

  Figure 1. VP1, VP2, VP3 protein Analysis of AAV Capsids by Western blot
  

  Western blot analysis of VP1, VP2, VP3 proteins of AAV type 1, 2, 5, 6, 8, 9, DJ and rh.1 was conducted using MonoRab? AAVX VP1/VP2/VP3 Antibody (5G4), mAb, Rabbit (GenScript, A02206, 0.1 μg/mL). The signal was developed with Peroxidase Conjugated Goat Anti-Rabbit IgG.
  

  Predicted Size for VP1, VP2 and VP3: 87, 72 and 62 kDa
  Observed Size for VP1, VP2 and VP3: 87, 72 and 62 kDa

  

  Figure 2. VP1 protein Analysis of AAV Capsids by Western blot

  Western blot analysis of VP1 protein of AAV type 1, 2, 5, 6, 8, 9, DJ and rh.1 was conducted using MonoRab? AAVX VP1 Antibody (24F5), mAb, Rabbit (GenScript, A02207, 0.1 μg/mL). The signal was developed with Peroxidase Conjugated Goat Anti-Rabbit IgG.

  Predicted Size: 87 kDa
  Observed Size: 87 kDa

• 物理病毒滴度定量檢測

  三質粒轉染HEK293細胞系統是生產rAAV的常用方法。病毒顆粒滴度（物理滴度）的檢測在rAAV生產過程中很重要，下圖展示了用Anti-AAV抗體定量檢測AAV滴度的原理（圖3）。金斯瑞提供多種Anti-AAV 抗體用于 AAV 物理滴度的定量（圖 4 和 5）。

  

  Figure 3. Principle of AAV titer quantitation with AAV antibody

  

  Figure 4. Standard Curve of AAV2 Capsids by Sandwich ELISA
  
  

  The Sandwich ELISA assay was developed by Anti-AAV2 (intact particle) Antibody (2C4), mAb, Mouse (GenScript, A02159-40; 2 μg/mL) and Anti-AAV2 (intact particle) Antibody (2C4) [Biotin], mAb, Mouse (GenScript, A02160-40; 2 μg/mL) as the capture and detection antibody, respectively.

  

  Figure 5. Standard curve of AAV8 by Sandwich ELISA
  
  

  The AAV8 Sandwich ELISA assay was developed by using MonoRab? AAV8 (intact particle) Antibody (75F2), mAb, Rabbit (GenScript, A02204; 2.5 μg/mL) and MonoRab? AAV8 (intact particle) Antibody (72E8), mAb, Rabbit (GenScript, A02205; 1 μg/mL) as the capture and detection antibody, respectively.

• 免疫原性分析

  人體內的抗AAV抗體可經由野生型AAV病毒感染產生，這些預先存在的抗AAV抗體可能會給基因治療帶來潛在的安全風險，因此有必要徹底地表征rAAV 產品免疫原性。抗藥物抗體 (ADA) 檢測是測量預先存在的抗AAV 抗體的關鍵工具，圖 6 描述了一種抗 AAV 抗體檢測的形式。金斯瑞的Anti-AAV 抗體可用作免疫原性分析的陽性對照或在 ADA 分析中制備標準曲線（圖 7 和 8）。

  

  Figure 6. Anti-AAV antibody assay format

  

  Figure 7. Standard Curve of AAV2 Capsids by Indirect ELISA
  
  

  ELISA binding of MonoRab? AAV2 (intact particle) Antibody (33G5), mAb, Rabbit (GenScript, A02203) with AAV2.
  Coating antigen: AAV2, 1 μg/mL.
  MonoRab? AAV2 (intact particle) Antibody (33G5), mAb, Rabbit (GenScript, A02203) dilution start from 1,000 ng/mL.

  

  Figure 8. Standard Curve of AAV8 Capsids by Indirect ELISA
  
  

  ELISA binding of MonoRab? AAV8 (intact particle) Antibody (75F2), mAb, Rabbit (GenScript, A02204) with AAV type 8.
  Coating antigen: AAV type 8, 1 μg/mL.
  MonoRab? AAV8 (intact particle) Antibody (75F2), mAb, Rabbit (GenScript, A02204) dilution start from 1,000 ng/mL.