穩(wěn)定細(xì)胞系用于分析 在研究中被廣泛使用，作為發(fā)現(xiàn)新途徑的工具，或用于發(fā)現(xiàn)治療方法。細(xì)胞基礎(chǔ)分析的開發(fā)需要一個經(jīng)過驗(yàn)證表達(dá)感興趣基因的單克隆穩(wěn)定細(xì)胞系。金斯瑞能夠使用我們基于慢病毒的平臺細(xì)胞系開發(fā)，開發(fā)具有難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和高表達(dá)難以表達(dá)基因的重組穩(wěn)定細(xì)胞系。金斯瑞也可以使用非慢病毒方法開發(fā)穩(wěn)定細(xì)胞系。以下是一些基于應(yīng)用的案例研究，展示了金斯瑞開發(fā)的穩(wěn)定細(xì)胞系。

案例分析：產(chǎn)生一個抗凋亡細(xì)胞系，以提高對遺傳毒性的篩選。

通過流式細(xì)胞術(shù)檢測微核，可以對非整倍體和染色體破裂原進(jìn)行遺傳毒性篩選。然而，由于細(xì)胞毒性引起的凋亡體的存在，而非遺傳毒性，這種類型的分析往往會產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

為了克服假陽性結(jié)果，一家大型制藥公司的科學(xué)家們開發(fā)了一種更健壯的分析方法，通過在FACS基礎(chǔ)的微核分析中使用一個抗凋亡的穩(wěn)定細(xì)胞系（在TK6細(xì)胞中過表達(dá)BCL-xL）。此外，還評估了非整倍體標(biāo)記物磷酸化組蛋白H3（H3）和雙鏈斷裂標(biāo)記物γH2AXser139（γH2AX DSB）的存在，以進(jìn)一步驗(yàn)證引起微核的化合物。

金斯瑞的基于慢病毒的穩(wěn)定細(xì)胞系服務(wù)成功提供了關(guān)鍵的重組穩(wěn)定細(xì)胞系，用于開發(fā)這種高度特異的遺傳毒性分析。

產(chǎn)生抗凋亡穩(wěn)定細(xì)胞系

TK6 Bcl-xL單穩(wěn)定克隆的qPCR和Western blot驗(yàn)證

上述數(shù)據(jù)顯示，野生型和BCL-xL過表達(dá)的TK6細(xì)胞系在細(xì)胞生長和毒性方面表現(xiàn)出相似的水平。此外，與野生型相比，TK6-BCL-xL表現(xiàn)出更少的凋亡體。BCL-xL細(xì)胞系對斷裂原（依托泊苷）和非整倍體原（長春堿）產(chǎn)生了陽性反應(yīng)，但對細(xì)胞毒性物質(zhì)（吐尼卡霉素）沒有產(chǎn)生陽性反應(yīng)。此外，斷裂原顯示出γH2aX DSB水平升高，而非整倍體原顯示出H3-P水平升高，細(xì)胞毒性物質(zhì)則沒有使γH2aXDSB或H3-P水平升高。

Richard A. Spellman, et al., "Strategies to Avoid Misleading Positives and to Identify Genotoxic Mechanisms in the Flow Cytometric In Vitro Micronucleus Assay in TK6 Cells" (poster presentation, 2014 Annual Genetic Toxicology Association Meeting, Newark, DE, May 7-8, 2014), accessed September 4, 2014 http://www.gta-us.org/scimtgs/2014Meeting/posters2014.html#poster1